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王希lily新蟲 (初入文壇)
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[交流]
求助關(guān)于原核表達(dá)包涵體純化的問(wèn)題？ 已有5人參與
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| 本人是新手，最近在做原核表達(dá)，表達(dá)載體為PET32，做到蛋白純化時(shí)，優(yōu)化條件后發(fā)現(xiàn)蛋白老是表達(dá)在沉淀中，所以需用尿素將包涵體溶解掛柱純化，但做到包涵體洗滌液（含2M尿素）洗滌時(shí)發(fā)現(xiàn)蛋白變成膠凍狀，根本沒(méi)辦法繼續(xù)用8M尿素溶解，更不用說(shuō)上柱純化了，我將包涵體洗滌液洗滌的上清跑SDS-PAGE，發(fā)現(xiàn)有少部分目的條帶。之后我又直接用8M尿素溶解，上清跑SDS-PAGE，發(fā)現(xiàn)幾乎沒(méi)有目的條帶。急求哪位大神能給點(diǎn)意見(jiàn)，為什么包涵體洗滌液會(huì)將蛋白洗成膠凍狀？ |
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4樓2015-09-14 22:17:31
hc-material
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2樓2015-09-14 14:46:22
王希lily
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3樓2015-09-14 16:06:48
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10樓2015-09-17 16:40:30
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