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王希lily新蟲 (初入文壇)
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[交流]
求助關(guān)于原核表達(dá)包涵體純化的問題？ 已有5人參與
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| 本人是新手，最近在做原核表達(dá)，表達(dá)載體為PET32，做到蛋白純化時(shí)，優(yōu)化條件后發(fā)現(xiàn)蛋白老是表達(dá)在沉淀中，所以需用尿素將包涵體溶解掛柱純化，但做到包涵體洗滌液（含2M尿素）洗滌時(shí)發(fā)現(xiàn)蛋白變成膠凍狀，根本沒辦法繼續(xù)用8M尿素溶解，更不用說上柱純化了，我將包涵體洗滌液洗滌的上清跑SDS-PAGE，發(fā)現(xiàn)有少部分目的條帶。之后我又直接用8M尿素溶解，上清跑SDS-PAGE，發(fā)現(xiàn)幾乎沒有目的條帶。急求哪位大神能給點(diǎn)意見，為什么包涵體洗滌液會(huì)將蛋白洗成膠凍狀？ |
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已經(jīng)有8人回復(fù)
9樓2015-09-17 15:05:15
hc-material
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專家經(jīng)驗(yàn): +702 - 應(yīng)助: 517 (博士)
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- 專業(yè): 核技術(shù)及其應(yīng)用
- 管轄: 生物科學(xué)
2樓2015-09-14 14:46:22
王希lily
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
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- 在線: 4.9小時(shí)
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- 注冊(cè): 2015-04-26
- 性別: MM
- 專業(yè): 基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)
3樓2015-09-14 16:06:48
穿白大褂約會(huì)
禁言 (小有名氣)
★ ★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-09-14 23:08:16
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-09-14 23:08:16
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4樓2015-09-14 22:17:31
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