 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2576 | 回復: 7 | |||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
learningying鐵桿木蟲 (著名寫手)
|
[求助]
Weatern Blotting實驗用ECL顯色請求指導
|
||
|
Weatern Blotting實驗用ECL顯色請求指導，背景一直很深，有時候整個膜都沒有辦法拍照，我們用的是ECL染色，然后選擇感光照片進行顯影，但是結(jié)果如下，請指正。具體的實驗過程如下： Sample Text 蛋白樣品制備 ：按照常規(guī)的方法進行，蛋白可溶。 蛋白濃度測定：BCA蛋白濃度測定試劑盒 上樣量30ug，大約體積是3ul。 (3) 聚丙烯酰胺凝膠電泳 先使用80 V恒壓電泳約40min，觀察到溴酚藍進入分離膠界面的時候使用120V恒壓電泳80min后，當溴酚藍到達膠的底端處附近停止電泳。 （4）轉(zhuǎn)膜. 恒壓15V轉(zhuǎn)移30min，可以看到Marker 條帶清晰，分散開來。 （5）封閉 轉(zhuǎn)膜結(jié)束，PBST中，漂洗3次，每次5 min，以便洗去膜上的轉(zhuǎn)膜液。 吸盡轉(zhuǎn)膜液，加入Western封閉液(購自碧云天)，在側(cè)擺搖床上緩慢搖動，室溫封閉60min或4℃封閉過夜。 （6）免疫染色 稀釋一抗 1:1000 ；二抗 1:5000;加入PBST，加入PBST洗膜3次，每次15min。 （7）ECL發(fā)光顯色 1.在暗室里將ECL試劑盒中的A液和B液等體積充分混勻。 2，將ECL混合液體覆蓋到PVDF上吸附了蛋白的一面，室溫下(25℃)反應(yīng)1min，用平頭鑷鉗住PVDF膜淋去多余的液體。 3.暗室中將PVDF膜置于壓片盒中的兩層保鮮膜中間，其中吸附有蛋白質(zhì)的一面朝上，平整地放置在壓片盒中。 4.將曝光的膠片放在顯影液中顯影3min，經(jīng)過清水沖洗除去顯影液后將膠片浸沒在定影液中1min。 |
回復此樓» 猜你喜歡
【2026考研調(diào)劑】制藥工程 284分 求相關(guān)專業(yè)調(diào)劑名額
已經(jīng)有7人回復
-
334分 一志愿武理-080500 材料求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復
-
0854電子信息求調(diào)劑
已經(jīng)有9人回復
-
347求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復
-
0854人工智能方向招收調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復
-
求b區(qū)院校調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復
-
材料與化工考研調(diào)劑
已經(jīng)有9人回復
-
求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復
-
總分293求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復
-
284求調(diào)劑
已經(jīng)有15人回復
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
learningying: 金幣+164, ★★★很有幫助 2015-09-16 19:35:15
youlinglyw: 金幣-50, 原樓主操作錯誤，根據(jù)樓主要求，回收部分金幣 2015-09-21 14:36:27
youlinglyw: 金幣-50, 原樓主操作錯誤，根據(jù)樓主要求，回收部分金幣 2015-09-21 14:36:46
youlinglyw: 金幣-50, 原樓主操作錯誤，根據(jù)樓主要求，回收部分金幣 2015-09-21 14:36:57
learningying: 金幣+164, ★★★很有幫助 2015-09-16 19:35:15
youlinglyw: 金幣-50, 原樓主操作錯誤，根據(jù)樓主要求，回收部分金幣 2015-09-21 14:36:27
youlinglyw: 金幣-50, 原樓主操作錯誤，根據(jù)樓主要求，回收部分金幣 2015-09-21 14:36:46
youlinglyw: 金幣-50, 原樓主操作錯誤，根據(jù)樓主要求，回收部分金幣 2015-09-21 14:36:57
|
可以參考里面的解決方法，或者看看其他公司的western blot trouble shooting |
» 本帖附件資源列表
-
歡迎監(jiān)督和反饋：小木蟲僅提供交流平臺，不對該內(nèi)容負責。
本內(nèi)容由用戶自主發(fā)布，如果其內(nèi)容涉及到知識產(chǎn)權(quán)問題，其責任在于用戶本人，如對版權(quán)有異議，請聯(lián)系郵箱：xiaomuchong@tal.com - 附件 1 : abcam實驗方案大全.pdf
2015-09-16 11:50:23, 5.64 M
6樓2015-09-16 11:52:24
kobe199613
木蟲之王 (知名作家)
- 應(yīng)助: 51 (初中生)
- 貴賓: 0.198
- 金幣: 70492
- 散金: 3123
- 紅花: 231
- 沙發(fā): 29
- 帖子: 5504
- 在線: 978.8小時
- 蟲號: 606575
- 注冊: 2008-09-19
- 性別: GG
- 專業(yè): 畜牧學
【答案】應(yīng)助回帖
★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
learningying: 金幣+1, ★有幫助 2015-09-16 10:23:41
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
learningying: 金幣+1, ★有幫助 2015-09-16 10:23:41
|
感覺顯影時間有點長啊，很久不做了，也不是很確定了，還有就是拍照的時候曝光時間，過長的話背景也會很深。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2015-09-16 09:39:19
3樓2015-09-16 10:49:17
learningying
鐵桿木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 8 (幼兒園)
- 金幣: 5431.9
- 散金: 323
- 紅花: 33
- 帖子: 1074
- 在線: 256.6小時
- 蟲號: 2055341
- 注冊: 2012-10-11
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學
4樓2015-09-16 10:56:26
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +6 | 元夕元 2026-03-20 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑 +4 | Koxui 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
[考研] 085600材料與化工調(diào)劑 +9 | A-哆啦Z夢 2026-03-23 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +3 | 冬十三 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料學碩333求調(diào)劑 +3 | 北道巷 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 化工專碩求調(diào)劑 +3 | question挽風 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料專碩331求調(diào)劑 +4 | 鮮當牛 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿河北工業(yè)大學0817化工278分求調(diào)劑 +7 | jhybd 2026-03-23 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 384求調(diào)劑 +3 | 子系博 2026-03-22 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿武理材料工程348求調(diào)劑 +6 | ￣^￣゜汗 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研]
求調(diào)劑材料學碩080500，總分289分
 5+3
|
@taotao 2026-03-19 | 21/1050 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑一志愿211 +3 | 上岸6666@ 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +4 | 來好運來來來 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 285求調(diào)劑 +6 | ytter 2026-03-22 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | .m.. 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0805材料320求調(diào)劑 +3 | 深海物語 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +12 | 梁梁校校 2026-03-19 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +7 | 司空. 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑一志愿南京航空航天大學289分 +3 | @taotao 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿吉林大學材料學碩321求調(diào)劑 +11 | Ymlll 2026-03-18 | 15/750 |
|