 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2556 | 回復(fù): 7 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
learningying鐵桿木蟲 (著名寫手)
|
[求助]
Weatern Blotting實驗用ECL顯色請求指導(dǎo)
|
|
|
Weatern Blotting實驗用ECL顯色請求指導(dǎo)，背景一直很深，有時候整個膜都沒有辦法拍照，我們用的是ECL染色，然后選擇感光照片進(jìn)行顯影，但是結(jié)果如下，請指正。具體的實驗過程如下： Sample Text 蛋白樣品制備 ：按照常規(guī)的方法進(jìn)行，蛋白可溶。 蛋白濃度測定：BCA蛋白濃度測定試劑盒 上樣量30ug，大約體積是3ul。 (3) 聚丙烯酰胺凝膠電泳 先使用80 V恒壓電泳約40min，觀察到溴酚藍(lán)進(jìn)入分離膠界面的時候使用120V恒壓電泳80min后，當(dāng)溴酚藍(lán)到達(dá)膠的底端處附近停止電泳。 （4）轉(zhuǎn)膜. 恒壓15V轉(zhuǎn)移30min，可以看到Marker 條帶清晰，分散開來。 （5）封閉 轉(zhuǎn)膜結(jié)束，PBST中，漂洗3次，每次5 min，以便洗去膜上的轉(zhuǎn)膜液。 吸盡轉(zhuǎn)膜液，加入Western封閉液(購自碧云天)，在側(cè)擺搖床上緩慢搖動，室溫封閉60min或4℃封閉過夜。 （6）免疫染色 稀釋一抗 1:1000 ；二抗 1:5000;加入PBST，加入PBST洗膜3次，每次15min。 （7）ECL發(fā)光顯色 1.在暗室里將ECL試劑盒中的A液和B液等體積充分混勻。 2，將ECL混合液體覆蓋到PVDF上吸附了蛋白的一面，室溫下(25℃)反應(yīng)1min，用平頭鑷鉗住PVDF膜淋去多余的液體。 3.暗室中將PVDF膜置于壓片盒中的兩層保鮮膜中間，其中吸附有蛋白質(zhì)的一面朝上，平整地放置在壓片盒中。 4.將曝光的膠片放在顯影液中顯影3min，經(jīng)過清水沖洗除去顯影液后將膠片浸沒在定影液中1min。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
284求調(diào)劑
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
一志愿山東大學(xué)藥學(xué)學(xué)碩求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
07化學(xué)280分求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
298-一志愿中國農(nóng)業(yè)大學(xué)-求調(diào)劑
已經(jīng)有12人回復(fù)
-
求材料，環(huán)境專業(yè)調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
335求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
一志愿吉大化學(xué)322求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
環(huán)境學(xué)碩288求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
341求調(diào)劑(一志愿湖南大學(xué)070300)
已經(jīng)有6人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
諸葛小汐
鐵桿木蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 10 (幼兒園)
- 金幣: 5447.1
- 紅花: 1
- 帖子: 161
- 在線: 70.6小時
- 蟲號: 1789711
- 注冊: 2012-05-01
- 性別: GG
- 專業(yè): 神經(jīng)生物學(xué)
7樓2015-09-16 13:34:21
kobe199613
木蟲之王 (知名作家)
- 應(yīng)助: 51 (初中生)
- 貴賓: 0.198
- 金幣: 70492
- 散金: 3123
- 紅花: 231
- 沙發(fā): 29
- 帖子: 5504
- 在線: 978.8小時
- 蟲號: 606575
- 注冊: 2008-09-19
- 性別: GG
- 專業(yè): 畜牧學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
learningying: 金幣+1, ★有幫助 2015-09-16 10:23:41
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
learningying: 金幣+1, ★有幫助 2015-09-16 10:23:41
|
感覺顯影時間有點(diǎn)長啊，很久不做了，也不是很確定了，還有就是拍照的時候曝光時間，過長的話背景也會很深。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2015-09-16 09:39:19
3樓2015-09-16 10:49:17
learningying
鐵桿木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 8 (幼兒園)
- 金幣: 5431.9
- 散金: 323
- 紅花: 33
- 帖子: 1074
- 在線: 256.6小時
- 蟲號: 2055341
- 注冊: 2012-10-11
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
4樓2015-09-16 10:56:26
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿山東大學(xué)藥學(xué)學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | 開開心心沒煩惱 2026-03-23 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085600材料與化工調(diào)劑 +7 | A-哆啦Z夢 2026-03-23 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 工科0856求調(diào)劑 +5 | 沐析汀汀 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[論文投稿] 急發(fā)核心期刊論文 +3 | 賢達(dá)問津 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +5 | 孅華 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 352求調(diào)劑 +3 | 大米飯！ 2026-03-22 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料與化工085600，總分304，本科有兩篇sci參與，求調(diào)劑 +4 | 幸運(yùn)的醬醬 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +4 | 來好運(yùn)來來來 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +10 | Faune 2026-03-21 | 10/500 |
|
|
|
[考研]
 一志愿東華大學(xué)控制學(xué)碩320求調(diào)劑
+3
|
Grand777 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料與化工（0856）304求B區(qū)調(diào)劑 +3 | 邱gl 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料 271求調(diào)劑 +5 | 展信悅_ 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 22 350 本科985求調(diào)劑，求老登收留 +3 | 李軼男003 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 白QF 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑 +9 | 何潤采123 2026-03-18 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 一志愿中海洋材料工程專碩330分求調(diào)劑 +8 | 小材化本科 2026-03-18 | 8/400 |
|
|
|
[考研] A區(qū)線材料學(xué)調(diào)劑 +5 | 周周無極 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩297已過四六級求調(diào)劑推薦 +11 | adaie 2026-03-19 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 一志愿福大288有機(jī)化學(xué)，求調(diào)劑 +3 | 小木蟲200408204 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 收復(fù)試調(diào)劑生 +4 | 雨后秋荷 2026-03-18 | 4/200 |
|