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神奇的網(wǎng)站新蟲 (初入文壇)
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[求助]
急急急：HPLC使用前中后相關(guān)問(wèn)題請(qǐng)教，謝謝 已有4人參與
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急急急向各大神求助： 我現(xiàn)在利用HPLC測(cè)面粉中的維生素B1、B2、B6和B9的含量，第一次接觸HPLC有幾個(gè)問(wèn)題求教大神們： 1、測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線單位是μg/ml，但最終論文中出現(xiàn)的應(yīng)是μg/g，想問(wèn)下這該怎么換算呢？文章中也沒有提及如何換算，該怎么處理才好呢？ 2、測(cè)定維生素B6時(shí)需要使用離子對(duì)試劑（庚烷磺酸鈉），測(cè)定維生素B9時(shí)需要使用離子對(duì)試劑（四丁基磷酸二氫銨），我的柱子是新柱子，請(qǐng)問(wèn)使用離子對(duì)試劑是否對(duì)柱子有傷害？應(yīng)該如何減少對(duì)柱子的損傷？在使用了離子對(duì)試劑的緩沖液與甲醇做流動(dòng)相后，是否不能再使用該柱子測(cè)定不含離子對(duì)作為流動(dòng)相的物質(zhì)么？每次使用完后應(yīng)該如何沖洗，沖洗多長(zhǎng)時(shí)間才能確保將離子對(duì)沖出去？ 3、測(cè)定維生素B9時(shí)，需要用SPE進(jìn)行萃取，我的SPE柱子是HYPERSEP C18 500MG/3ml 的，這個(gè)可以重復(fù)使用么？我查詢了下說(shuō)萃取分為四部：柱的活化和平衡、上樣、沖洗和洗脫感興趣的化合物，沖樣是用一種強(qiáng)得能洗脫雜質(zhì)而又弱得能保留感興趣的化合物的沖洗液來(lái)沖洗雜質(zhì)；洗脫是用溶劑將被吸附在萃取柱上的化合物洗脫在溶液里，也就是說(shuō)上樣后得到的液體和沖樣得到的液體要丟棄掉，洗脫的液體留下是吧？ 如果大神們看到我的提問(wèn)，求回復(fù)指導(dǎo)下，謝謝眾大神。 [ Last edited by archbishop on 2015-9-16 at 20:59 ] |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
archbishop: 金幣+1 2015-09-16 23:19:52
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
archbishop: 金幣+1 2015-09-16 23:19:52
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1. 一般情況下 都會(huì)用ug/ml 為什么非要用 ug/g 2. 我分析用很多離子對(duì)， 一般用水相慢慢把離子對(duì)換出來(lái)。比如你的流動(dòng)相是 離子對(duì)緩沖：甲醇（60:40）。 做完實(shí)驗(yàn)后慢慢換成 水：甲醇 60:40。 然后進(jìn)行一般的柱子日常維護(hù)， 比如10%或20% 甲醇沖洗。 3. 一般不重復(fù)使用，a) 面粉中的大分子可能被吸附在柱子上很難洗脫，影響柱效。b）下一次洗脫B6中可能會(huì)引入雜質(zhì)。 一般用TLC 檢測(cè)是否目標(biāo)化合物是否洗脫出來(lái)（洗脫順序可以先用TLC 估量一下）。然后收集洗脫液，合并旋蒸。 |
3樓2015-09-16 22:34:13
2樓2015-09-16 22:19:40
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大神，第二個(gè)問(wèn)題你一般都沖多長(zhǎng)時(shí)間？還有我看文獻(xiàn)中說(shuō)緩沖鹽中含有少量離子對(duì)，可這個(gè)少量又如何鑒定呢？ 求大神指點(diǎn)什么叫TLC 謝過(guò)大神 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
4樓2015-09-17 08:04:57
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