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神奇的網(wǎng)站新蟲 (初入文壇)
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[求助]
急急急:HPLC使用前中后相關(guān)問題請教,謝謝 已有4人參與
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急急急向各大神求助: 我現(xiàn)在利用HPLC測面粉中的維生素B1、B2、B6和B9的含量,第一次接觸HPLC有幾個問題求教大神們: 1、測定的標(biāo)準(zhǔn)曲線單位是μg/ml,但最終論文中出現(xiàn)的應(yīng)是μg/g,想問下這該怎么換算呢?文章中也沒有提及如何換算,該怎么處理才好呢? 2、測定維生素B6時需要使用離子對試劑(庚烷磺酸鈉),測定維生素B9時需要使用離子對試劑(四丁基磷酸二氫銨),我的柱子是新柱子,請問使用離子對試劑是否對柱子有傷害?應(yīng)該如何減少對柱子的損傷?在使用了離子對試劑的緩沖液與甲醇做流動相后,是否不能再使用該柱子測定不含離子對作為流動相的物質(zhì)么?每次使用完后應(yīng)該如何沖洗,沖洗多長時間才能確保將離子對沖出去? 3、測定維生素B9時,需要用SPE進(jìn)行萃取,我的SPE柱子是HYPERSEP C18 500MG/3ml 的,這個可以重復(fù)使用么?我查詢了下說萃取分為四部:柱的活化和平衡、上樣、沖洗和洗脫感興趣的化合物,沖樣是用一種強(qiáng)得能洗脫雜質(zhì)而又弱得能保留感興趣的化合物的沖洗液來沖洗雜質(zhì);洗脫是用溶劑將被吸附在萃取柱上的化合物洗脫在溶液里,也就是說上樣后得到的液體和沖樣得到的液體要丟棄掉,洗脫的液體留下是吧? 如果大神們看到我的提問,求回復(fù)指導(dǎo)下,謝謝眾大神。 [ Last edited by archbishop on 2015-9-16 at 20:59 ] |
新蟲 (初入文壇)
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大神,第二個問題你一般都沖多長時間?還有我看文獻(xiàn)中說緩沖鹽中含有少量離子對,可這個少量又如何鑒定呢? 求大神指點(diǎn)什么叫TLC 謝過大神 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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1. 一般情況下 都會用ug/ml 為什么非要用 ug/g 2. 我分析用很多離子對, 一般用水相慢慢把離子對換出來。比如你的流動相是 離子對緩沖:甲醇(60:40)。 做完實驗后慢慢換成 水:甲醇 60:40。 然后進(jìn)行一般的柱子日常維護(hù), 比如10%或20% 甲醇沖洗。 3. 一般不重復(fù)使用,a) 面粉中的大分子可能被吸附在柱子上很難洗脫,影響柱效。b)下一次洗脫B6中可能會引入雜質(zhì)。 一般用TLC 檢測是否目標(biāo)化合物是否洗脫出來(洗脫順序可以先用TLC 估量一下)。然后收集洗脫液,合并旋蒸。 |

新蟲 (初入文壇)
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