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susannawsj銅蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
SDS-PAGE電泳條帶變彎 & 表達(dá)純化出的單個(gè)蛋白呈兩條帶 已有2人參與
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兩個(gè)問(wèn)題： 1. 最近跑的蛋白膠條帶總是彎的，呈“皺眉”狀，這是什么原因？附圖（C-cleavage 10倍N & 只有CG的斷裂.jpg） 2. 我的蛋白表達(dá)并用Ni 純化后，目標(biāo)蛋白總是呈現(xiàn)兩條的情況，有一條分子量是對(duì)的，還有一條在上面，偏大。附圖（2） ps. 我的質(zhì)粒以及重組菌都經(jīng)過(guò)驗(yàn)證測(cè)序沒(méi)有問(wèn)題 這是什么原因？求指教~~ C-cleavage 10倍N & 只有CG的斷裂.jpg 2.png |
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ypslly
新蟲(chóng) (初入文壇)
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【答案】應(yīng)助回帖
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膠沒(méi)壓好吧，梳子是不是取早了？配個(gè)濃點(diǎn)的膠不知道會(huì)不會(huì)好點(diǎn)。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
2樓2015-09-17 22:43:22
Z.Ada
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3樓2015-09-17 22:46:23
bugakbug
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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1. 跑電泳時(shí)的電壓過(guò)高，使樣品移動(dòng)過(guò)快。 => 調(diào)降電壓試試? 2. 若使用的是Bio-Rad系統(tǒng)電泳槽，可能是兩片玻璃間的buffer加太少或者是外漏到外槽，使條帶變成微笑型。 => 把兩片玻璃間的buffer補(bǔ)滿(mǎn)與玻璃齊高，外槽也是加滿(mǎn)。 3. 2、3樓說(shuō)的問(wèn)題，凝膠不均勻或者凝膠的濃度不夠。=>凝膠形成的速度太快時(shí)，減少TEMED的體積試試；濃度不夠的話(huà)，提高凝膠濃度。 |
4樓2015-09-18 09:37:04
susannawsj
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5樓2015-09-21 09:54:33
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