 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3505 | 回復(fù): 4 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
kangaroo0513新蟲 (正式寫手)
|
[求助]
哪位帥哥有“WB600枯草菌”和“PAX01質(zhì)粒”的詳細(xì)操作說明書？ 已有1人參與
|
|
|
或者使用手冊？？悄悄賜一個給我唄。。 以前沒做過枯草，真心求詳細(xì)protocol。。。 順便請教，pAX01的MCS是不是用BamHI？然后，插入的方向是正向還是反向？網(wǎng)上給出的Pxyl promoter是反向的，但是把序列拷到snapgege里，發(fā)現(xiàn)那有個正向的Amp promoter。。于是就凌亂了。。。另外，如果是BamHI單酶切的話，需不需要加額外的SD序列和分泌信號肽？還是pAX01自身就帶了分泌信號肽和SD序列了？ 1111.png 1112.png |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有247人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
搖搖擺擺搖搖擺?/a>
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 83.6
- 帖子: 8
- 在線: 46.5小時
- 蟲號: 6916530
- 注冊: 2017-07-07
- 專業(yè): 微生物學(xué)
4樓2018-01-20 10:29:22
dorecnu
木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 31 (小學(xué)生)
- 金幣: 2336.7
- 紅花: 10
- 帖子: 785
- 在線: 93.3小時
- 蟲號: 448155
- 注冊: 2007-11-01
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kangaroo0513: 金幣+5, ★★★很有幫助 2015-09-28 14:53:48
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kangaroo0513: 金幣+5, ★★★很有幫助 2015-09-28 14:53:48
|
1. 從第一張圖上看該質(zhì)粒的MCS是not1,sacI,sacI,bamHI 2. 插入方向可以通過設(shè)計雙酶切位點確定，改變待插入基因啟動子和終止子的酶切位點即可確定克隆片段的插入方向。如果使用單酶切位點本身不能確定片段插入方向，但可以在后續(xù)的篩選中，通過測序篩選自己理想的片段插入方向，只是這樣成本略高，不建議使用。如果只有bamhI可用，記得在單酶切鏈接的時候，使用堿性磷酸酶將載體去磷酸化防止載體自連接。 3. 從樓主問問的的方式來看，樓主應(yīng)該是有pax01質(zhì)粒的序列的，所以是否需要加入SD序列和信號肽，可以拿起始密碼子上游10個堿基分析一下是否富含嘌呤即可，信號肽也的分析也是一樣，都有載體序列了這些不是一看就知道嗎？ 4. 至于啟動子方向那就更簡單了，不管軟件的分析結(jié)果，拿載體序列，分析起始密碼子上游和下游系列，看是否都存在啟動子典型的-35區(qū)“AATGTGTGGAAT”和-10區(qū)“TTGACATATATT”相近的序列及AGGAGG核糖體結(jié)合位點（新手可以使用http://molbiol-tools.ca/Promoters.htm幫助一下預(yù)測），如果雙向都有，建議用PxyA作為啟動子。 5. 據(jù)我的經(jīng)驗該質(zhì)粒應(yīng)該不自帶外分泌信號肽，這個很好解決，在設(shè)計插入基因時，自己加入一段就可以了。 祝實驗順利！ |
2樓2015-09-28 09:51:32
kangaroo0513
新蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 154 (高中生)
- 金幣: 2277.4
- 散金: 100
- 紅花: 29
- 帖子: 464
- 在線: 119.4小時
- 蟲號: 2621902
- 注冊: 2013-08-28
- 專業(yè): 細(xì)胞物質(zhì)運輸
|
感謝。。。我上傳個gb格式的序列文件，您幫我瞧一下具體有莫有信號肽和RBS？我的初步判斷也是沒有，但是由于第一次折騰枯草，不敢大意。。另外，如果我要用枯草表達(dá)一個人源的蛋白酶前體（本身帶信號肽，用于定位酸性囊泡），我可以在N端再加一個分泌的信號肽讓枯草把這個蛋白酶前體分泌出去不？如果可以的話，依您的經(jīng)驗是哪個信號肽效果會好一些？ |
» 本帖附件資源列表
-
歡迎監(jiān)督和反饋：小木蟲僅提供交流平臺，不對該內(nèi)容負(fù)責(zé)。
本內(nèi)容由用戶自主發(fā)布，如果其內(nèi)容涉及到知識產(chǎn)權(quán)問題，其責(zé)任在于用戶本人，如對版權(quán)有異議，請聯(lián)系郵箱：xiaomuchong@tal.com - 附件 1 : pAX01.gb
- 附件 2 : PAX01_Vector_Information.pdf
2015-09-28 12:24:12, 12.4 K
2015-09-28 12:24:19, 38.4 K
3樓2015-09-28 12:27:01
kangaroo0513
新蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 154 (高中生)
- 金幣: 2277.4
- 散金: 100
- 紅花: 29
- 帖子: 464
- 在線: 119.4小時
- 蟲號: 2621902
- 注冊: 2013-08-28
- 專業(yè): 細(xì)胞物質(zhì)運輸
5樓2018-01-22 08:42:15
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿安徽大學(xué)計算機科學(xué)與技術(shù)學(xué)碩，331分求調(diào)劑 +3 | 蔣昌鵬qtj 2026-04-01 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 一志愿北京科技，085601總分305求調(diào)劑 +9 | 半生瓜！ 2026-04-01 | 10/500 |
|
|
|
[考博] 26年申博 +3 | staryer 2026-03-30 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +9 | 一樣YWY 2026-04-01 | 9/450 |
|
|
[考研] 311求調(diào)劑一志愿合肥工業(yè)大學(xué) +14 | 秋二十二 2026-03-30 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +9 | 小蠟新筆 2026-03-29 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 材料科學(xué)與工程求調(diào)劑 +13 | 深V宿舍吧 2026-03-29 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 一志愿a區(qū)211，085601-307分求調(diào)劑 +10 | 黨嘉豪 2026-03-31 | 23/1150 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑求助 +7 | 13287130938 2026-03-31 | 7/350 |
|
|
|
[基金申請] 面上5B能上會嗎？ +8 | redcom 2026-03-29 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿浙江大學(xué)工科動力工程370,數(shù)一121,專業(yè)課135，現(xiàn)在能去哪里 +3 | 080700調(diào)劑 2026-03-30 | 4/200 |
|
|
|
[考博] 材料專業(yè)申博 +5 | 杜雨婷dyt 2026-03-29 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085601一志愿西北工業(yè)大學(xué)初試346 +4 | 085601初試346 2026-03-30 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 329求調(diào)劑 +8 | 星野? 2026-03-26 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境科學(xué)與工程334分求調(diào)劑 +6 | 王一一依依 2026-03-30 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿北京理工大學(xué)本科211材料工程294求調(diào)劑 +8 | mikasa的圍巾 2026-03-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 356求調(diào)劑 +4 | gysy?s?a 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085600，專業(yè)課化工原理，321分求調(diào)劑 +5 | 大饞小子 2026-03-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑 +3 | raojunqi0129 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué)求調(diào)劑 +4 | 起個名咋這么難 2026-03-27 | 4/200 |
|