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mfmdbx新蟲 (初入文壇)
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[求助]
哪位有纖維素酶活力測定方法，謝謝 已有1人參與
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| 哪位有纖維素酶活力測定方法（DNS）法，麻煩分享下，謝謝，另外麻煩附參考方法來源 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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mfmdbx(99503102代發(fā)): 金幣+2, 謝謝應(yīng)助，請繼續(xù)關(guān)注樓主問題噢！ 2015-09-29 09:51:56
mfmdbx(99503102代發(fā)): 金幣+13, 謝謝應(yīng)助，繼續(xù)加油！ 2016-01-30 20:43:29
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纖維素酶DNS酶活力測定方法 1 定義 1g固體酶粉在40℃和pH值4.2條件下，每分鐘水解纖維素生成1微克葡萄糖的量為1個酶活力單位，以u/g表示。 2 原理 纖維素酶分解纖維素，產(chǎn)生纖維二糖、葡萄糖等還原糖，纖維二糖、葡萄糖等還原糖能將3，5二硝基水楊酸中的硝基還原成橙黃色的氨基化合物，利用比色法測定其還原物生成量，表示酶的活力。 3.試劑和溶液 3.1 1％葡萄糖標準溶液（同β－葡聚糖酶酶活測定） 3.2 羧甲基纖維素鈉(CMC)溶液 取1g羧甲基纖維素鈉（粘度300～600厘泊）,加入pH4.2的磷酸氫二鈉－檸檬酸緩沖液(甲液414ml和乙液586ml并用pH計校正至pH為4.2)混合均勻,水浴加熱至溶,冷卻后用2M鹽酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH到4.2,定溶至100ml,再用二層紗布過濾，此溶液在4℃冰箱貯存，有效期3天。取濾液100ml， 20ml，蒸餾水40ml，混勻，貯冰箱備用。 3.3 DNS 試劑（同β－葡聚糖酶酶活測定） 4儀器和設(shè)備 4.1恒溫水浴鍋(40℃±0.2℃) 4.2分光光度計 含10mm比色皿，可在550nm處測量吸光度。 5測定步驟 5.1 標準曲線繪制 分別吸取1%葡萄糖標準溶液0、1.0、 2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml于50ml容量瓶中，用蒸餾水制成每ml分別含有葡萄糖0、200、400、600、800、1000、1200mg的稀標準液。各取不同濃度的稀標準液0.5ml于試管中，加入CMC溶液1.5ml、DNS試劑3.0ml，于沸水浴中沸騰7min，取出后立即加入蒸餾水10ml混勻。冷卻后，用10mm比色皿，在波長550nm處用分光光度計分別測定其吸光度。以吸光度為縱坐標，相對應(yīng)的葡萄糖濃度為橫坐標，繪制標準曲線或計算回歸方程。 5.2待測酶液的制備（同β－葡聚糖酶酶活測定） 5.3 比色測定 精確吸取經(jīng)待測稀釋酶液0.5ml，40℃預(yù)熱5min，加入經(jīng)40℃預(yù)熱的CMC液1.5ml（每個樣品同時作3支平行試管），于40℃水浴精確反應(yīng)10min，立即加入DNS試劑3.0ml終止反應(yīng)，以后按標準曲線制作步驟測定樣品吸光度。 同時進行空白對照測定，取稀釋酶液0.5ml，先加入DNS試劑3.0ml，再加入CMC液1.5ml，其余步驟同于樣品測定。 6.計算 X=cn/(0.5*10) 式中：X－樣品的酶活力，u/g； c－由樣品的平均吸光度從標準曲線或回歸方程求得的相對應(yīng)的葡萄糖的量，mg； n－樣品的稀釋倍數(shù)(制備成的酶液ml數(shù)/2g酶粉)，ml/g； 0.5－參與反應(yīng)的酶液量，ml； 10—反應(yīng)時間，min。 空白對照液的配制： (1)精確加入0.2ml稀釋酶液。 (2)精確加入1.8 ml pH = 4.8醋酸緩沖溶液。 (3)放入新華1號濾紙一條。 (4)精確加入3ml DNS試劑。 (5)隨同對照樣，放入沸水浴中反應(yīng)15min(注意：參見操作步驟6)。 (6)冷卻后加入蒸餾水定容到25ml。 9．以空白對照液調(diào)零點，在λmax = 550nm下，用分光光度計測量吸光度值。 濾紙酶活力 = A × 5 × 200 × 1000 / 60 （u/g） A 吸光度值在標準曲線上對應(yīng)的葡萄糖量（mg）。 CMC酶（Cx）活力測定方法 用pH = 4.8醋酸緩沖溶液配制1%CMC溶液。 準確稱取1g酶粉，用蒸餾水定容到2000ml，配制0.5g/L的稀釋酶溶液。 在有標準刻度線的試管中加入1.8ml1%CMC溶液。 再加入0.2ml稀釋酶液。 在50±1℃水浴中保溫反應(yīng)30min后，立即加入3ml DNS試劑。 空白對照液用1.8ml1%CMC溶液加入3ml DNS試劑，再加入0.2ml稀釋酶液。 同時在沸水浴中反應(yīng)10min，加入蒸餾水定容到25ml。 以空白對照液調(diào)零點，在λmax = 550nm下，用分光光度計測量吸光度值。 Cx酶活力 = A × 5 × 2000 × 1000 / 30（u/g） |
2樓2015-09-28 16:39:48
939011455
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3樓2015-09-28 17:31:34
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5樓2015-09-28 23:37:07
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6樓2018-09-11 15:13:57
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