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哪位有纖維素酶活力測定方法，謝謝 已有1人參與
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| 哪位有纖維素酶活力測定方法（DNS）法，麻煩分享下，謝謝，另外麻煩附參考方法來源 |
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【答案】應助回帖
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感謝參與，應助指數(shù) +1
mfmdbx(99503102代發(fā)): 金幣+2, 謝謝應助，請繼續(xù)關注樓主問題噢！ 2015-09-29 09:51:56
mfmdbx(99503102代發(fā)): 金幣+13, 謝謝應助，繼續(xù)加油！ 2016-01-30 20:43:29
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纖維素酶DNS酶活力測定方法 1 定義 1g固體酶粉在40℃和pH值4.2條件下，每分鐘水解纖維素生成1微克葡萄糖的量為1個酶活力單位，以u/g表示。 2 原理 纖維素酶分解纖維素，產(chǎn)生纖維二糖、葡萄糖等還原糖，纖維二糖、葡萄糖等還原糖能將3，5二硝基水楊酸中的硝基還原成橙黃色的氨基化合物，利用比色法測定其還原物生成量，表示酶的活力。 3.試劑和溶液 3.1 1％葡萄糖標準溶液（同β－葡聚糖酶酶活測定） 3.2 羧甲基纖維素鈉(CMC)溶液 取1g羧甲基纖維素鈉（粘度300～600厘泊）,加入pH4.2的磷酸氫二鈉－檸檬酸緩沖液(甲液414ml和乙液586ml并用pH計校正至pH為4.2)混合均勻,水浴加熱至溶,冷卻后用2M鹽酸或氫氧化鈉調節(jié)pH到4.2,定溶至100ml,再用二層紗布過濾，此溶液在4℃冰箱貯存，有效期3天。取濾液100ml， 20ml，蒸餾水40ml，混勻，貯冰箱備用。 3.3 DNS 試劑（同β－葡聚糖酶酶活測定） 4儀器和設備 4.1恒溫水浴鍋(40℃±0.2℃) 4.2分光光度計 含10mm比色皿，可在550nm處測量吸光度。 5測定步驟 5.1 標準曲線繪制 分別吸取1%葡萄糖標準溶液0、1.0、 2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml于50ml容量瓶中，用蒸餾水制成每ml分別含有葡萄糖0、200、400、600、800、1000、1200mg的稀標準液。各取不同濃度的稀標準液0.5ml于試管中，加入CMC溶液1.5ml、DNS試劑3.0ml，于沸水浴中沸騰7min，取出后立即加入蒸餾水10ml混勻。冷卻后，用10mm比色皿，在波長550nm處用分光光度計分別測定其吸光度。以吸光度為縱坐標，相對應的葡萄糖濃度為橫坐標，繪制標準曲線或計算回歸方程。 5.2待測酶液的制備（同β－葡聚糖酶酶活測定） 5.3 比色測定 精確吸取經(jīng)待測稀釋酶液0.5ml，40℃預熱5min，加入經(jīng)40℃預熱的CMC液1.5ml（每個樣品同時作3支平行試管），于40℃水浴精確反應10min，立即加入DNS試劑3.0ml終止反應，以后按標準曲線制作步驟測定樣品吸光度。 同時進行空白對照測定，取稀釋酶液0.5ml，先加入DNS試劑3.0ml，再加入CMC液1.5ml，其余步驟同于樣品測定。 6.計算 X=cn/(0.5*10) 式中：X－樣品的酶活力，u/g； c－由樣品的平均吸光度從標準曲線或回歸方程求得的相對應的葡萄糖的量，mg； n－樣品的稀釋倍數(shù)(制備成的酶液ml數(shù)/2g酶粉)，ml/g； 0.5－參與反應的酶液量，ml； 10—反應時間，min。 空白對照液的配制： (1)精確加入0.2ml稀釋酶液。 (2)精確加入1.8 ml pH = 4.8醋酸緩沖溶液。 (3)放入新華1號濾紙一條。 (4)精確加入3ml DNS試劑。 (5)隨同對照樣，放入沸水浴中反應15min(注意：參見操作步驟6)。 (6)冷卻后加入蒸餾水定容到25ml。 9．以空白對照液調零點，在λmax = 550nm下，用分光光度計測量吸光度值。 濾紙酶活力 = A × 5 × 200 × 1000 / 60 （u/g） A 吸光度值在標準曲線上對應的葡萄糖量（mg）。 CMC酶（Cx）活力測定方法 用pH = 4.8醋酸緩沖溶液配制1%CMC溶液。 準確稱取1g酶粉，用蒸餾水定容到2000ml，配制0.5g/L的稀釋酶溶液。 在有標準刻度線的試管中加入1.8ml1%CMC溶液。 再加入0.2ml稀釋酶液。 在50±1℃水浴中保溫反應30min后，立即加入3ml DNS試劑。 空白對照液用1.8ml1%CMC溶液加入3ml DNS試劑，再加入0.2ml稀釋酶液。 同時在沸水浴中反應10min，加入蒸餾水定容到25ml。 以空白對照液調零點，在λmax = 550nm下，用分光光度計測量吸光度值。 Cx酶活力 = A × 5 × 2000 × 1000 / 30（u/g） |
2樓2015-09-28 16:39:48
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5樓2015-09-28 23:37:07
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6樓2018-09-11 15:13:57
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