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[求助]
大家?guī)兔纯磒cr的結(jié)果？還要不要做T載體鏈接和藍(lán)白斑篩選 已有2人參與
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本人小白，以前也沒做過分子實(shí)驗(yàn)，屬于跨專業(yè)。導(dǎo)師讓做植物內(nèi)生真菌的實(shí)驗(yàn)，我用CTAB法提取了植物的總的DNA，用真菌的通用引物ITS1--ITS4，和真菌特異性引物ITS1F--ITS4，用20ul體系先試著跑了PCR，結(jié)果如下圖。 看文獻(xiàn)說擴(kuò)增出來的片段應(yīng)該在500-800左右，現(xiàn)在跑的可以嗎？一些論文用50ul體系跑完pcr后，進(jìn)行了切膠，t載體鏈接，藍(lán)白斑篩選后才送公司去測序，也有人說可以直接拿去給公司測序？請教下大家二者的區(qū)別，麻煩幫我看下我跑的pcr圖有沒有什么問題？多謝 IMG_20151012_134424.jpg IMG_20151012_143430.jpg |
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2樓2015-10-14 18:41:15
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本帖內(nèi)容被屏蔽 |
3樓2015-10-14 18:52:18
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感謝回帖！我用的marker是2000的，marker確實(shí)沒跑好，聽取你的意見下次重新?lián)Q下電泳液。我想再問下，目的片段在500—800bp間，可是這個區(qū)間的條帶好像都連在一起，沒怎么跑開，那切膠時(shí)，可以一起切下，然后在菌液pcr時(shí)，再用通用引物篩選嗎？還是說切膠時(shí)就要把那些條帶切開（感覺挨得太近了）？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2015-10-15 00:37:17
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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本帖內(nèi)容被屏蔽 |
5樓2015-10-15 01:16:00
【答案】應(yīng)助回帖
商家已經(jīng)主動聲明此回帖可能含有宣傳內(nèi)容
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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這種情況下，肯定是要做克隆之后才能送到公司測序的。直接測的話，可以用16/18s的二代測序方法：http://www.tolobio.com/service_detail.php?id=161 （不需要克隆，但是也需要純化，如果樣不多的話，不合算）。 我們也提供類似技術(shù)服務(wù)，建議關(guān)注：http://www.tolobio.com/service_detail.php?id=110 |
6樓2015-10-15 12:20:34
7樓2015-10-16 23:38:51
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