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我是傳奇456金蟲 (正式寫手)
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[求助]
pGreen系列載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌出現(xiàn)問題 已有1人參與
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具體情況是，pGreenII 62-SK系列載體，Kana抗性。將目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒后，在kana抗性LB中篩選陽性克隆，測(cè)序結(jié)果正確，然后進(jìn)行農(nóng)桿菌熱激轉(zhuǎn)化（質(zhì)粒加入約1ug），涂在含Rif（10ug/ml）Kana(50ug/ml)的LB平板。48h后僅長(zhǎng)了寥寥數(shù)個(gè)菌落，而control組pcambia2301長(zhǎng)了很多。另外，目的載體同時(shí)還涂布了只含Kana(50ug/ml)的LB平板，也長(zhǎng)了幾十個(gè)菌落。 我想請(qǐng)問下，這種情況是為什么？是否是pGreen質(zhì)粒本身問題？還是轉(zhuǎn)化過程中質(zhì)粒出現(xiàn)了問題？ 試了好幾次，包括質(zhì)粒濃度，Rif濃度的控制等，而長(zhǎng)的僅有的幾個(gè)菌落挑了搖培后，PCR也測(cè)不到目的片段。 還請(qǐng)各位大俠幫忙！！  另附載體圖譜 pGreenII 62-SK.png |
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我欲乘風(fēng)歸去
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 18 (小學(xué)生)
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- 專業(yè): 植物生理與生化
2樓2015-10-15 10:55:05
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本帖內(nèi)容被屏蔽 |
3樓2015-10-15 11:20:08
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