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我是傳奇456金蟲 (正式寫手)
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[求助]
pGreen系列載體轉化農桿菌出現問題 已有1人參與
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具體情況是，pGreenII 62-SK系列載體，Kana抗性。將目的基因構建重組質粒后，在kana抗性LB中篩選陽性克隆，測序結果正確，然后進行農桿菌熱激轉化（質粒加入約1ug），涂在含Rif（10ug/ml）Kana(50ug/ml)的LB平板。48h后僅長了寥寥數個菌落，而control組pcambia2301長了很多。另外，目的載體同時還涂布了只含Kana(50ug/ml)的LB平板，也長了幾十個菌落。 我想請問下，這種情況是為什么？是否是pGreen質粒本身問題？還是轉化過程中質粒出現了問題？ 試了好幾次，包括質粒濃度，Rif濃度的控制等，而長的僅有的幾個菌落挑了搖培后，PCR也測不到目的片段。 還請各位大俠幫忙��！  另附載體圖譜 pGreenII 62-SK.png |
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3樓2015-10-15 11:20:08
我欲乘風歸去
木蟲 (正式寫手)
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- 專業(yè): 植物生理與生化
2樓2015-10-15 10:55:05
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