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smaileon新蟲 (小有名氣)
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[求助]
sds-page電泳marker的條帶不能完全跑出來，有什么原因。 已有6人參與
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國(guó)慶到現(xiàn)在跑了好多次電泳，marker明明有七條帶的，只能跑出六條。跑了幾次都是六條條帶，一開始以為跑的不夠長(zhǎng)，后面都跑到溴酚藍(lán)都快出來了，還是六條，覺得心酸。 然后就把marker再取一點(diǎn)出來拿去煮和離心后再點(diǎn)樣，結(jié)果更少了，也更不清楚了。 會(huì)是Ph的問題嗎？還是marker的問題，用了一年多了。 我在做重組的酵母菌（黑曲酶堿性蛋白酶）的酶活性質(zhì)優(yōu)化。 一點(diǎn)都不順暢，好心塞。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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有可能是Mark堆積在一起了，導(dǎo)致倆條帶分不清。 1 跑濃縮膠的電壓是多少？上樣后是否立即加電壓進(jìn)行電泳 2 配膠用的試劑是不是新配？特別是Tris-HCl6.8和8.8這兩個(gè)的PH值 3 也可適當(dāng)增加濃縮膠的長(zhǎng)度，以80V電壓進(jìn)行濃縮膠跑樣，待樣品進(jìn)入分離膠后換成120V電壓試試。 最后就是你做的SDS中酵母蛋白表達(dá)的條帶是否有影響？ |
8樓2015-10-19 13:27:26
weandyouzhy
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增加電壓或延長(zhǎng)保留時(shí)間，看看別人是否一樣的結(jié)果。marker是否用錯(cuò) 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
2樓2015-10-17 08:23:25
jjf139
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電泳條件看看是否合適，建議看看你的marker有無降解。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2015-10-17 08:33:31
smaileon
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怎么看marker蛋白質(zhì)是否有降解？ 一般都有保存在負(fù)20度冰箱的。 平時(shí)電泳用80v把它們壓一段時(shí)間，想把它們壓成一條線，但是壓不成，都是兩層的感覺。也很奇怪。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2015-10-17 08:42:18
smaileon
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現(xiàn)在用的是80v壓，100v跑分離膠，一般都是跑一個(gè)多小時(shí)，估計(jì)那塊膠就十厘米這樣。。 我怕電壓大了，時(shí)間就短了，大的還沒來得及分離，小的已經(jīng)跑出去了。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2015-10-17 08:45:34
6樓2015-10-19 11:17:15
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youlinglyw: 金幣+8, 贈(zèng)人玫瑰手有余香，生物科學(xué)有你更精彩 2015-10-27 10:08:53
| 12%以上的膠，當(dāng)你的溴酚藍(lán)那條線離板底0.5cm左右就停止電泳的話，Maker都是能跑出7條帶的，當(dāng)然前提是你的膠濃度是準(zhǔn)確的。而15%的膠一般溴酚藍(lán)跑出板底也基本能跑出7條帶，因?yàn)楹脦状蚊Σ贿^來，跑電泳的時(shí)候忘記了，經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)這種情況，但是經(jīng)過長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)沒有問題。同時(shí)，若您的膠濃度只有10%或者7%甚至更低的話，根據(jù)我的經(jīng)驗(yàn)，10%濃度的膠要在離板底2cm左右的時(shí)候停止電泳，7%的膠需要更早，差不多3cm左右吧。 |
7樓2015-10-19 13:01:56
9樓2015-10-19 16:20:54
10樓2015-10-19 16:36:50
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