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高保真酶擴(kuò)出目的基因后，如何高效加尾（最好提供加尾體系） 已有1人參與
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最近用用高保真酶擴(kuò)增目的片段，然后加A，但是一直連接不上T載體，都快急死了，求各位大神幫忙�。ㄏＭ峁┘游搀w系），謝謝了 我的具體做法是：高保真酶（全式金公司）擴(kuò)增后，跑電泳，瓊脂糖凝膠回收，回收后用takara公司的Taq酶加尾，然后采用兩種方法回收，一種方法是跑電泳，凝膠回收，另一種方法直接純化，這兩種方法我都做過(guò)，但是都不出結(jié)果連接不上。 |
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2樓2015-10-22 16:29:07
kangaroo0513
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人品好的時(shí)候怎么連都連得上，不好的時(shí)候折騰死也連不上。。這是我的經(jīng)驗(yàn)。 我人品差到爆的時(shí)候，選擇用平端連接了，于是就連上了。雖然效率低很多，長(zhǎng)出來(lái)的克隆數(shù)少，但是總是有的，陽(yáng)性率也高。推薦你試試。 我把平端載體環(huán)化做成了plasmid，需要的話找我換或者購(gòu)買。151354061 |
3樓2015-10-23 03:29:04
4樓2015-10-23 11:19:47
kangaroo0513
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5樓2015-10-23 15:02:42
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6樓2015-10-28 15:16:02
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7樓2015-10-30 13:32:17
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我藍(lán)白斑篩選，能長(zhǎng)菌，長(zhǎng)的還不少，菌液pcr就是沒(méi)有目的帶。。關(guān)鍵坑人的是引物居然能和載體序列匹配的差不多，快郁悶死了。。。。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
8樓2015-12-23 19:22:53
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