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wyfdgg新蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
畢赤酵母表達(dá)脂肪酶基因 已有2人參與
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我是利用Ppic9k來(lái)轉(zhuǎn)化畢赤酵母的，連入基因之后再用BglII酶切，然后電轉(zhuǎn)畢赤酵母細(xì)胞�；虻拈L(zhǎng)度在1000-2000之間。 轉(zhuǎn)化后在RDB平板上面涂板，有很多個(gè)白色的單克隆。然后用YPD洗板在突細(xì)胞懸液到Y(jié)PD遺傳霉素平板上面，我用的遺傳霉素濃度為1g/l、2g/l、3g/l、4g/l。但是即使是4g/l的平板上面長(zhǎng)出來(lái)的單克隆，提取基因組DNA之后做PCR驗(yàn)證，大部分也不能批到目的條帶。少數(shù)含有目的條帶的菌株進(jìn)行產(chǎn)酶培養(yǎng)的時(shí)候，幾乎沒(méi)有酶活。而且跑SDS-PAGE時(shí)，也看不到蛋白條帶。 |
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wyfdgg
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3樓2015-11-12 09:49:13
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