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zcqh27木蟲 (正式寫手)
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[求助]
大腸桿菌基因工程菌凍干菌種的培養(yǎng)與蛋白表達(dá) 已有2人參與
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我有一株含有PET質(zhì)粒的BL21DE3大腸桿菌，用于蛋白表達(dá)。菌種穩(wěn)定性較好，甘油保藏的菌種表達(dá)非常穩(wěn)定。為了更好的保藏這個(gè)菌種，我將活化的菌種低速低溫離心后，用10%脫脂牛奶重懸，并分裝到無(wú)菌安瓿管中，預(yù)凍，凍干后，抽真空，并火焰封口，液氮保藏。 剛剛制備的安瓿管做過驗(yàn)證，表達(dá)量還可以，但是放置了幾個(gè)月后，在做搖瓶驗(yàn)證，就沒有表達(dá)了，同步用甘油保藏的菌種表達(dá)沒問題。 凍干的菌種依然有相應(yīng)的抗性，抽提質(zhì)粒測(cè)序，目的基因也正常。 因此，實(shí)在不清楚這是為什么，懷疑是不是菌種保藏方法的原因，但是目的基因正常，卻沒表達(dá)，這實(shí)在不知如何解釋。希望有高人指點(diǎn)一下。不勝感激。 |
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2樓2015-11-12 14:12:09
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
zcqh27: 金幣+2, ★有幫助, 我同步做的凍干和甘油保藏，甘油的菌種沒問題，凍干的提質(zhì)粒測(cè)序也沒問題，就是沒有表達(dá)了。也活化過，活化了兩代還是不行。 2015-11-17 16:16:08
zcqh27: 金幣+2, ★有幫助, 我同步做的凍干和甘油保藏，甘油的菌種沒問題，凍干的提質(zhì)粒測(cè)序也沒問題，就是沒有表達(dá)了。也活化過，活化了兩代還是不行。 2015-11-17 16:16:08
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1.培養(yǎng)基的問題，培養(yǎng)基成分是否一致，成分是否變質(zhì)。 2.原核蛋白表達(dá)不出來可能就是菌的問題，一般由冷凍干燥保藏的菌，處于休眠狀態(tài)，需要2-3代恢復(fù)活力。 |
3樓2015-11-12 14:36:20
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