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zcqh27木蟲 (正式寫手)
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[求助]
大腸桿菌基因工程菌凍干菌種的培養(yǎng)與蛋白表達 已有2人參與
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我有一株含有PET質(zhì)粒的BL21DE3大腸桿菌,用于蛋白表達。菌種穩(wěn)定性較好,甘油保藏的菌種表達非常穩(wěn)定。為了更好的保藏這個菌種,我將活化的菌種低速低溫離心后,用10%脫脂牛奶重懸,并分裝到無菌安瓿管中,預凍,凍干后,抽真空,并火焰封口,液氮保藏。 剛剛制備的安瓿管做過驗證,表達量還可以,但是放置了幾個月后,在做搖瓶驗證,就沒有表達了,同步用甘油保藏的菌種表達沒問題。 凍干的菌種依然有相應的抗性,抽提質(zhì)粒測序,目的基因也正常。 因此,實在不清楚這是為什么,懷疑是不是菌種保藏方法的原因,但是目的基因正常,卻沒表達,這實在不知如何解釋。希望有高人指點一下。不勝感激。 |

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[考研]
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