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關(guān)于腫瘤干細(xì)胞培養(yǎng)的問題
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本人最近在做腫瘤干細(xì)胞成團(tuán)實(shí)驗(yàn)。從乳腺癌231細(xì)胞系分離干細(xì)胞�？墒欠蛛x出來之后老是養(yǎng)不活，想請教一下養(yǎng)過腫瘤干細(xì)胞的蟲友一些問題。 原先我們231細(xì)胞系的培養(yǎng)條件是：L15培養(yǎng)基+10%FBS 篩選干細(xì)胞的靶標(biāo)是LADH+，每次能篩選到的細(xì)胞比例是3%左右。 篩選回來之后培養(yǎng)在低粘附六孔板上。培養(yǎng)基是DMEM/F12加胰島素，EGF，bFGF,B27,氫化可的松等生長因子。無血清37℃隔絕空氣培養(yǎng)。 每次到第二天的時(shí)候就會發(fā)現(xiàn)板上全是一個(gè)個(gè)類似細(xì)胞碎片的顆粒狀物質(zhì)，細(xì)胞顏色很深。然后過幾天就感覺細(xì)胞不行了。 有幾個(gè)問題： ①.看文獻(xiàn)上大家養(yǎng)腫瘤干細(xì)胞都是用的DMEM/F12,而我們的細(xì)胞原先的培養(yǎng)基是L15，突然換掉可以嗎？因?yàn)榘次易约旱倪壿嫞杉?xì)胞無血清培養(yǎng)應(yīng)該是L15+各種生長因子才對。 ②. 板底部的東西到底是細(xì)胞碎片還是污染了呢？用的培養(yǎng)基都是我剛用濾膜濾過的，照理說不會污染�？墒强淳W(wǎng)上有人說支原體污染的情形和我這個(gè)蠻類似的。 希望養(yǎng)過的大神們給我點(diǎn)建議，謝謝了�。�！ 所有金幣全部奉上！�。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。�！ |
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2樓2016-01-07 12:25:22
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