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shanxiatian新蟲 (初入文壇)
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[求助]
為什么IgG刺激巨噬細(xì)胞后不產(chǎn)生TNFα？急
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我的實驗是想利用FcγR來刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNFα。但是實驗做了一個月都沒有進展，現(xiàn)在很著急，請各位大神支招。 實驗過程如下：小鼠提前3-4天腹腔注射1ml淀粉肉湯培養(yǎng)基，實驗前禁食一晚，第二天分離小鼠腹腔巨噬細(xì)胞。實驗中設(shè)立的LPS對照組，順利的刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生了大量的TNFα。但是FcγR配體也就是小鼠IgG組卻不能刺激產(chǎn)生TNFα。小鼠IgG是提前包被到96孔板的，37度包被過夜。IgG購自sigma,96孔板是高結(jié)合力的板和普通的細(xì)胞培養(yǎng)板都嘗試過，全部失敗。 包被的IgG刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNFα，這類實驗文獻中有不少人做成功了，不知道為什么我做不出來？難道是IgG不好用嗎？ps:文獻中也沒有標(biāo)注用個哪個貨號品牌，有些甚至還是自己純化的IgG. 最后想請教大家，用0.22um過濾IgG可以嗎，因為是要刺激細(xì)胞，所以避免污染就給過濾了，難道是濾膜吸附了很多IgG導(dǎo)致實際濃度損失很大造成的？ 有做過相似實驗的大神嗎？請幫幫我吧。感激不盡~我是新手還沒有太多金幣，但很是很感謝對實驗提出建議的各位  |
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