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shanxiatian新蟲 (初入文壇)
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[求助]
為什么IgG刺激巨噬細(xì)胞后不產(chǎn)生TNFα？急
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我的實(shí)驗(yàn)是想利用FcγR來(lái)刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNFα。但是實(shí)驗(yàn)做了一個(gè)月都沒有進(jìn)展，現(xiàn)在很著急，請(qǐng)各位大神支招。 實(shí)驗(yàn)過程如下：小鼠提前3-4天腹腔注射1ml淀粉肉湯培養(yǎng)基，實(shí)驗(yàn)前禁食一晚，第二天分離小鼠腹腔巨噬細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)中設(shè)立的LPS對(duì)照組，順利的刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生了大量的TNFα。但是FcγR配體也就是小鼠IgG組卻不能刺激產(chǎn)生TNFα。小鼠IgG是提前包被到96孔板的，37度包被過夜。IgG購(gòu)自sigma,96孔板是高結(jié)合力的板和普通的細(xì)胞培養(yǎng)板都嘗試過，全部失敗。 包被的IgG刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNFα，這類實(shí)驗(yàn)文獻(xiàn)中有不少人做成功了，不知道為什么我做不出來(lái)？難道是IgG不好用嗎？ps:文獻(xiàn)中也沒有標(biāo)注用個(gè)哪個(gè)貨號(hào)品牌，有些甚至還是自己純化的IgG. 最后想請(qǐng)教大家，用0.22um過濾IgG可以嗎，因?yàn)槭且碳ぜ?xì)胞，所以避免污染就給過濾了，難道是濾膜吸附了很多IgG導(dǎo)致實(shí)際濃度損失很大造成的？ 有做過相似實(shí)驗(yàn)的大神嗎？請(qǐng)幫幫我吧。感激不盡~我是新手還沒有太多金幣，但很是很感謝對(duì)實(shí)驗(yàn)提出建議的各位  |
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