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肉中提取核苷酸(如ADP,IMP,肌苷等)用什么柱子（季銨鹽，氨丙基或者其他）純化比較好 已有1人參與
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| 要用毛細(xì)電泳分析豬肉中的幾種核苷酸及降解產(chǎn)物的含量，現(xiàn)在標(biāo)品已經(jīng)分開了，但是樣品里的幾種核苷酸及降解產(chǎn)物不知道是含量太少還是沒有，感覺沒有一個和標(biāo)品能對上的，而且樣品里有很大個雜質(zhì)峰，那些雜質(zhì)怎樣才能除去，又能分析出我所需要的目標(biāo)產(chǎn)物啊，需要用那些柱子前處理萃取嗎？ |
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2樓2015-12-05 15:23:35
【答案】應(yīng)助回帖
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如果不行，你可以考慮換個設(shè)備參考我們之前的方法： 1.3.3 HPLC測定ATP、ADP、AMP以及IMP 宰后肌肉中ATP、ADP、AMP以及IMP的含量變化通過HPLC來測定。從液氮中取800mg冷凍樣，加入3mL7%高氯酸（PCA）中勻漿，15000g離心10min，上清液用1.44mL 0.85 M K2CO3 中和，15000g離心10min，0.2 µm濾膜過濾。ATP,ADP,AMP,IMP的含量在Agilent 1100色譜儀上進(jìn)行測定，檢測波長254nm，色譜柱使用反相C18色譜柱(Zorbax SB 4 mm × 250 mm, 5 μm 粒徑, Agilent公司)，流速1ml/min。流動相 A為磷酸緩沖液（2.5mM 四丁基硫酸氫銨，0.04M磷酸二氫鉀，0.0M磷酸氫二鉀，pH 7.0）。流動相B為甲醇。洗脫程序如表1- 1。核苷酸測定結(jié)果最后采用外標(biāo)法，通過保留時間和峰面積對核苷酸進(jìn)行定性和定量分析。 得到結(jié)果如下： 2.3宰后牛骨骼肌細(xì)胞能量水平的變化 如圖1-10所示，四種核苷酸在本研究的保留時間分別為：IMP，4.8min；AMP，8.6min；ADP，15.2min；ATP，19.3min。肌肉樣品中核苷酸類物質(zhì)根據(jù)混合標(biāo)樣中各物質(zhì)的保留時間被識別出來，如圖1-11所示。核苷酸類物質(zhì)測定過程中定量分析參數(shù)設(shè)定及回歸方程如表1-2所示。 |
3樓2015-12-05 15:29:20
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