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肉中提取核苷酸(如ADP,IMP,肌苷等)用什么柱子(季銨鹽,氨丙基或者其他)純化比較好 已有1人參與
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| 要用毛細電泳分析豬肉中的幾種核苷酸及降解產(chǎn)物的含量,現(xiàn)在標品已經(jīng)分開了,但是樣品里的幾種核苷酸及降解產(chǎn)物不知道是含量太少還是沒有,感覺沒有一個和標品能對上的,而且樣品里有很大個雜質(zhì)峰,那些雜質(zhì)怎樣才能除去,又能分析出我所需要的目標產(chǎn)物啊,需要用那些柱子前處理萃取嗎? |
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如果不行,你可以考慮換個設備參考我們之前的方法: 1.3.3 HPLC測定ATP、ADP、AMP以及IMP 宰后肌肉中ATP、ADP、AMP以及IMP的含量變化通過HPLC來測定。從液氮中取800mg冷凍樣,加入3mL7%高氯酸(PCA)中勻漿,15000g離心10min,上清液用1.44mL 0.85 M K2CO3 中和,15000g離心10min,0.2 µm濾膜過濾。ATP,ADP,AMP,IMP的含量在Agilent 1100色譜儀上進行測定,檢測波長254nm,色譜柱使用反相C18色譜柱(Zorbax SB 4 mm × 250 mm, 5 μm 粒徑, Agilent公司),流速1ml/min。流動相 A為磷酸緩沖液(2.5mM 四丁基硫酸氫銨,0.04M磷酸二氫鉀,0.0M磷酸氫二鉀,pH 7.0)。流動相B為甲醇。洗脫程序如表1- 1。核苷酸測定結果最后采用外標法,通過保留時間和峰面積對核苷酸進行定性和定量分析。 得到結果如下: 2.3宰后牛骨骼肌細胞能量水平的變化 如圖1-10所示,四種核苷酸在本研究的保留時間分別為:IMP,4.8min;AMP,8.6min;ADP,15.2min;ATP,19.3min。肌肉樣品中核苷酸類物質(zhì)根據(jù)混合標樣中各物質(zhì)的保留時間被識別出來,如圖1-11所示。核苷酸類物質(zhì)測定過程中定量分析參數(shù)設定及回歸方程如表1-2所示。 |


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