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dirkyoung金蟲 (正式寫手)
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[求助]
免疫組化顯色問題，新手求助 已有3人參與
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| 新手做免疫組化，用的是鼠源的一抗PCNA，羊抗鼠的二抗，HRP標(biāo)記。DAB試劑盒顯色，抗體都用ＰＢＳ按照最大濃度稀釋。結(jié)果不要說真假陽(yáng)性，連背景幾乎都沒有（封閉步驟我都已經(jīng)省略了），說明書的顯微鏡下控制反應(yīng)時(shí)間，我是什么都看不到的。用二抗液直接和顯色液反應(yīng)只有非常非常弱的棕色。剛好實(shí)驗(yàn)室有個(gè)elisa的TMB試劑盒，和二抗反應(yīng)幾乎瞬間變色，二抗稀釋液和dab工作液反應(yīng)難道不該很快變色嗎？dab試劑盒用了兩家的都是這個(gè)樣子（博士德和中杉金橋，都算是國(guó)內(nèi)不錯(cuò)的牌子吧）。周圍沒有做免疫組化的人，實(shí)在太無力了到底問題出在哪兒呢？我看很多做組化的都是糾結(jié)背景太強(qiáng)的問題。 |
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hoyeung
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3樓2015-12-23 11:02:12
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【答案】應(yīng)助回帖
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一抗稀釋濃度一般在1：400左右非特異性較低，當(dāng)然試劑盒不同稀釋濃度也不同這個(gè)需要自己多試幾次。抗原修復(fù)時(shí)間和溫度要足夠，組織取材要快，準(zhǔn)。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2015-12-24 10:51:39
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