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dirkyoung金蟲 (正式寫手)
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[求助]
免疫組化顯色問題,新手求助 已有3人參與
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| 新手做免疫組化,用的是鼠源的一抗PCNA,羊抗鼠的二抗,HRP標(biāo)記。DAB試劑盒顯色,抗體都用PBS按照最大濃度稀釋。結(jié)果不要說真假陽性,連背景幾乎都沒有(封閉步驟我都已經(jīng)省略了),說明書的顯微鏡下控制反應(yīng)時間,我是什么都看不到的。用二抗液直接和顯色液反應(yīng)只有非常非常弱的棕色。剛好實驗室有個elisa的TMB試劑盒,和二抗反應(yīng)幾乎瞬間變色,二抗稀釋液和dab工作液反應(yīng)難道不該很快變色嗎?dab試劑盒用了兩家的都是這個樣子(博士德和中杉金橋,都算是國內(nèi)不錯的牌子吧)。周圍沒有做免疫組化的人,實在太無力了到底問題出在哪兒呢?我看很多做組化的都是糾結(jié)背景太強的問題。 |
捐助貴賓 (小有名氣)
版主 (文壇精英)
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一抗稀釋濃度一般在1:400左右非特異性較低,當(dāng)然試劑盒不同稀釋濃度也不同這個需要自己多試幾次?乖迯(fù)時間和溫度要足夠,組織取材要快,準(zhǔn)。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |

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