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關(guān)于甘油冷凍保存菌種 大家是怎么做的？
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我大概查了一下 目前在甘油冷凍離心貌似沒有一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的做法？我查到的情況如下 （1）甘油濃度：在10%-80%的都有 （2）菌的形式 ①以前跟我們實(shí)驗(yàn)室合作的一個(gè)工程師教給我們的做法是把純菌劃斜面，菌長(zhǎng)好后直接把滅菌20%甘油2mL倒在試管里，用接菌環(huán)把菌刮到甘油里，把甘油倒在甘油管里。 ②隔壁實(shí)驗(yàn)室的做法是菌種液體培養(yǎng)，將液體培養(yǎng)菌液離心，去掉液體，留下沉淀，加入新培養(yǎng)基再加入同體積的50%甘油，重懸，倒在甘油管里。 ③還了解到一種做法是液體培養(yǎng)的培養(yǎng)液直接加入同體積甘油，然后混勻倒在甘油管里。 （3）保存 有的說直接放在-80℃冰箱里；有的說先放到-20℃冰箱預(yù)冷，再轉(zhuǎn)移到-80℃冰箱里；還有的說只在-20℃冰箱里保存即可。 （4）保存時(shí)間 有的說2-4個(gè)月、有的說一兩年、有的說十年。。 （5）菌種活化 甘油管保存的菌種活化使用，有的說在37℃水浴快速解凍然后接培養(yǎng)液；有的說要在冰塊上緩慢解凍然后接培養(yǎng)液。 那么請(qǐng)問大家 大家都是怎么操作的、、甘油管冷凍保存有標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范么？ 我覺得操作上分歧這么大說明這些中方法都是可以的。。。。 |
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我們實(shí)驗(yàn)室都是這樣做的，LZ可自行采納: （1）配置50%甘油，121攝氏度高壓滅菌20min，4攝氏度凍存待用 （2）菌液生長(zhǎng)濃度達(dá)到一定OD值即可進(jìn)行保存 （3）850ul菌液+150ul滅菌甘油 （4）一般保存在—20攝氏度即可，一年左右 （5）菌體活化:建議緩慢凍融（常溫放置或自來水中放置）后再取1%接種量接種到培養(yǎng)基中。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2015-12-02 23:37:18
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我們實(shí)驗(yàn)室是甘油最終濃度是25% 直接凍-30 沒那么嚴(yán)格吧 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
6樓2015-12-02 23:40:50
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我們實(shí)驗(yàn)室是30%已滅菌的甘油，跟菌液1：1混合，液氮速凍后，-80°保存。以前我用過隔壁實(shí)驗(yàn)室的60%的甘油，混合比例改一下就可以了。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2015-12-02 23:24:02
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菌液與20%甘油等比例混合，零下20度保存一年沒問題。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2015-12-02 23:31:15
明刃
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7樓2015-12-03 14:52:32
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我們一直是按第三種方法做的 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
8樓2015-12-03 18:55:21
9樓2015-12-03 20:35:15
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