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[交流]
關(guān)于甘油冷凍保存菌種 大家是怎么做的？
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我大概查了一下 目前在甘油冷凍離心貌似沒有一個標準的做法？我查到的情況如下 （1）甘油濃度：在10%-80%的都有 （2）菌的形式 ①以前跟我們實驗室合作的一個工程師教給我們的做法是把純菌劃斜面，菌長好后直接把滅菌20%甘油2mL倒在試管里，用接菌環(huán)把菌刮到甘油里，把甘油倒在甘油管里。 ②隔壁實驗室的做法是菌種液體培養(yǎng)，將液體培養(yǎng)菌液離心，去掉液體，留下沉淀，加入新培養(yǎng)基再加入同體積的50%甘油，重懸，倒在甘油管里。 ③還了解到一種做法是液體培養(yǎng)的培養(yǎng)液直接加入同體積甘油，然后混勻倒在甘油管里。 （3）保存 有的說直接放在-80℃冰箱里；有的說先放到-20℃冰箱預(yù)冷，再轉(zhuǎn)移到-80℃冰箱里；還有的說只在-20℃冰箱里保存即可。 （4）保存時間 有的說2-4個月、有的說一兩年、有的說十年。。 （5）菌種活化 甘油管保存的菌種活化使用，有的說在37℃水浴快速解凍然后接培養(yǎng)液；有的說要在冰塊上緩慢解凍然后接培養(yǎng)液。 那么請問大家 大家都是怎么操作的、、甘油管冷凍保存有標準操作規(guī)范么？ 我覺得操作上分歧這么大說明這些中方法都是可以的。。。。 |
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納樣飄發(fā): 金幣+1 2015-12-03 09:25:12
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
納樣飄發(fā): 金幣+1 2015-12-03 09:25:12
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我們實驗室是30%已滅菌的甘油，跟菌液1：1混合，液氮速凍后，-80°保存。以前我用過隔壁實驗室的60%的甘油，混合比例改一下就可以了。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2015-12-02 23:24:02
2樓2015-12-02 22:16:10
★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
納樣飄發(fā): 金幣+1 2015-12-03 09:25:06
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納樣飄發(fā): 金幣+1 2015-12-03 09:25:06
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菌液與20%甘油等比例混合，零下20度保存一年沒問題。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2015-12-02 23:31:15
小不了強
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納樣飄發(fā): 金幣+2 2015-12-03 09:24:58
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納樣飄發(fā): 金幣+2 2015-12-03 09:24:58
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我們實驗室都是這樣做的，LZ可自行采納: （1）配置50%甘油，121攝氏度高壓滅菌20min，4攝氏度凍存待用 （2）菌液生長濃度達到一定OD值即可進行保存 （3）850ul菌液+150ul滅菌甘油 （4）一般保存在—20攝氏度即可，一年左右 （5）菌體活化:建議緩慢凍融（常溫放置或自來水中放置）后再取1%接種量接種到培養(yǎng)基中。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2015-12-02 23:37:18
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