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RT-PCR實時熒光定量PCR詳細過程 已有2人參與
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Real-Time PCR是指在PCR反應體系中加入熒光基團，通過熒光染料或熒光標記的特異性探針，對PCR產物進行標記跟蹤，利用熒光信號的實時變化檢測PCR擴增反應中每一個循環(huán)擴增物量的變化，最后通過Ct值和標準曲線的關系，并結合相應的軟件對未知模板進行相對或絕對定量的方法。 實驗流程： 1、設計并合成Real-Time PCR引物 2、引物溶解后使用TaqDNA聚合酶進行SG PCR反應 3、客戶樣品RNA抽提 原裝進口TRIZOL試劑進行樣品RNA勻漿抽提 4、RNA質量檢測 將抽提RNA進行瓊脂糖凝膠電泳，檢測抽提RNA純度及完整性 5、使用原裝進口逆轉錄酶將RNA逆轉錄為cDNA 6、制作標準曲線樣品 進行相對定量，需要先將樣品的目的基因及管家基因進行擴增，其產物進行梯度稀釋用作標準曲線 7、標準曲線樣品和待測樣品分別加入到含有SG的RT-PCR反應液中，進行RT-PCR擴增 8、檢測結果進行標準曲線分析 以對待測樣品的目的基因進行定量。相對定量實驗需要進一步用樣品的目的基因測得值除以管家基因測得值以矯正誤差，所得結果為某樣品目的基因的相對含量。 南京百世金生物技術有限公司 |
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3樓2017-10-15 21:25:00
biotech_zhou
木蟲 (著名寫手)
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- 專業(yè): 免疫生物學
2樓2016-04-25 17:13:27
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