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cgkbhf新蟲 (初入文壇)
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[求助]
ELISA提高抗原抗體特異性結(jié)合 已有1人參與
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請(qǐng)教各位大神！ 我最近在做ELISA，先在酶標(biāo)板包被抗原，然后加入少量能夠和抗原特異性結(jié)合的酶標(biāo)抗體（按理論計(jì)算抗原摩爾量遠(yuǎn)大于酶標(biāo)抗體），發(fā)現(xiàn)就算是怎么增大包被抗原量，酶標(biāo)抗體（始終定量）最多只能減少30%（通過(guò)測(cè)反應(yīng)前后OD值確定），感覺(jué)抗原飽和了，為什么會(huì)出現(xiàn)這種情況？我想至少結(jié)合60%，該怎么做？我只有5金幣了，各位大神幫忙分析一下。感激不盡�。�！ |
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yyy0305
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【答案】應(yīng)助回帖
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我知道你的實(shí)驗(yàn)過(guò)程了，但是我還是沒(méi)弄清楚你的實(shí)驗(yàn)?zāi)康�。有幾點(diǎn)可以討論一下1.拿酶標(biāo)抗體減少的OD值和顯色的OD值比較是沒(méi)有意義的。具體請(qǐng)查看朗伯比爾定律。他們有不同的吸光系數(shù)。2.如果需要抗原全部占據(jù)，你包被的抗原必須是少量的，請(qǐng)根據(jù)抗原和酶聯(lián)抗體的摩爾分子量進(jìn)行計(jì)算，而且是遠(yuǎn)遠(yuǎn)少量的1:10左右，這樣應(yīng)該有平臺(tái)期出現(xiàn)，酶聯(lián)不同加入濃度實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)同時(shí)做，這樣好找平臺(tái)期 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
8樓2015-12-08 07:50:22
2樓2015-12-06 10:22:31
cgkbhf
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3樓2015-12-06 20:15:09
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
cgkbhf: 金幣+5, ★★★很有幫助, 有幫助，謝謝了��！ 2015-12-08 19:05:02
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
cgkbhf: 金幣+5, ★★★很有幫助, 有幫助，謝謝了��！ 2015-12-08 19:05:02
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不知道題主設(shè)計(jì)這個(gè)實(shí)驗(yàn)的目的是什么？是進(jìn)行抗體的定量還是進(jìn)行抗原和抗體結(jié)合活性的測(cè)量？ 看樣子像是想進(jìn)行抗原抗體結(jié)合活性的測(cè)量，這個(gè)實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)方案應(yīng)該是包被少量的抗原，抗體做梯度稀釋，然后OD值進(jìn)行四參數(shù)擬合，理論上在抗體濃度較高時(shí)幾個(gè)點(diǎn)，信號(hào)會(huì)在平臺(tái)期，后面會(huì)隨濃度下降，抗體的信號(hào)也會(huì)下降，結(jié)合60%的點(diǎn)這個(gè)時(shí)候是能找到的。 抗原要是過(guò)量包被的話，定量的抗體都結(jié)合上去了，信號(hào)當(dāng)然不會(huì)有太大變化。 注意OD值讀數(shù)一般儀器的檢測(cè)極限在3.5-4之間，如果信號(hào)在這個(gè)范圍內(nèi)，信號(hào)值可能就不在線性范圍了，信號(hào)不可信，也就是說(shuō)信號(hào)不能真實(shí)反饋結(jié)合的強(qiáng)弱了 |
4樓2015-12-06 21:02:49
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