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淘七九懶鐵桿木蟲 (著名寫手)
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[交流]
一步克隆法隨機(jī)建庫！急求大神幫忙�。�！
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| 情況：最近在用蛋白工程的相關(guān)工作，主要是做建立隨機(jī)突變文庫，我用的易錯PCR擴(kuò)增的目的條帶，引物是用諾唯贊的一步克隆法試劑盒相關(guān)軟件設(shè)計(jì)的，引物應(yīng)該沒有問題，在做易錯PCR的時候，我改變的是Mg2+、Mn2+的濃度，然后載體用的是我之前構(gòu)建好的，帶有目的片段的B-pet28載體，然后雙酶切(BamHI/XhoI)獲得線性的pet28,連接的時候先估測濃度，按照說明書上加的，轉(zhuǎn)入BL21后卡那板上根本就不長或者就一兩個�，F(xiàn)在我正在努力找原因，希望有用過一步克隆法試劑盒的人提供些幫助，給些建議，多謝多謝啦 |
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2樓2015-12-07 10:46:59
janjanjanjan
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3樓2016-01-24 20:19:47
淘七九懶
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4樓2016-01-25 21:01:25
潔123
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
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你好，我想問一下米的問題解決了嗎？酶切，連接以后是直接電轉(zhuǎn)到你的宿主菌里了嗎？我現(xiàn)在也在做突變建庫，連接后產(chǎn)物直接電轉(zhuǎn)效率并不好。想請問有什么建議嗎？ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
5樓2017-11-18 10:43:53
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