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[求助]
TA克隆的時(shí)候，含目的片段的質(zhì)粒和不含目的片段的質(zhì)粒會(huì)進(jìn)入同一個(gè)感受態(tài)細(xì)胞中嗎 已有3人參與
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| RT，菌落PCR，挑單菌落PCR發(fā)現(xiàn)，用M13通用引物PCR，出來(lái)2條片段，根據(jù)大小判定一個(gè)是含有目的片段的結(jié)果，一個(gè)是不含目的片段的結(jié)果，含目的片段的質(zhì)粒和不含目的片段的質(zhì)粒會(huì)進(jìn)入同一個(gè)感受態(tài)細(xì)胞中嗎 |
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FTD2015
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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可以出現(xiàn)啊，你想如果酶切不完全，或者僅僅是單酶切，陽(yáng)性質(zhì)粒和重組質(zhì)粒都存在，這種概率是有的。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
2樓2015-12-07 13:52:07
3樓2015-12-07 19:35:29
4樓2015-12-07 19:41:05
zyfskj
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5樓2015-12-07 19:44:58
6樓2015-12-08 10:38:00
7樓2015-12-08 10:40:02
享受雅雨
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8樓2015-12-08 10:48:17
zyfskj
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一個(gè)轉(zhuǎn)化子，這一小堆菌里提出的質(zhì)粒，我覺(jué)得占主要的還是你的連上的那個(gè),你可以將這個(gè)菌進(jìn)行擴(kuò)培養(yǎng)再提質(zhì)粒那樣濃度就高了對(duì)嗎？一開(kāi)始挑的轉(zhuǎn)化子長(zhǎng)得菌的量只是粗略讓你判斷是否連上了，如果你覺(jué)得連上了，就切一下，再次確認(rèn)一下，或者 pcr 你的質(zhì)粒是否有目的片段。只有驗(yàn)證成功了才會(huì)擴(kuò)培酶切回收。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
9樓2015-12-09 10:52:54
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切膠回收后濃度會(huì)低 我建議你可以用高保真的酶來(lái)擴(kuò) 擴(kuò)出來(lái)之后再切膠回收 再用回收的片段擴(kuò)PCR 這樣應(yīng)該可以得到單一條帶 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
10樓2015-12-09 12:27:49
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