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18761615793木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
小蟲(chóng)
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[求助]
急急急，在線等，關(guān)于蛋白體外活性檢測(cè)的問(wèn)題
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| 蛋白體外活性檢測(cè)的方法有哪些，具體操作是什么，原理是什么，謝謝，如有幫助發(fā)金幣 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
18761615793: 金幣+20, ★★★★★最佳答案, 很有幫助 2015-12-08 10:06:26
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體外的蛋白活力檢測(cè)主要分為結(jié)合和功能兩方面。 結(jié)合：就是蛋白和目的靶點(diǎn)之間的結(jié)合能力的強(qiáng)弱，這個(gè)其實(shí)是測(cè)量可逆反應(yīng)過(guò)程中的蛋白和目的靶點(diǎn)的解離平衡常數(shù)。一般會(huì)用同位素檢測(cè)或者ELISA進(jìn)行，你可以搜索Ligand-Binding Assay，能夠找到不少資料。 功能是建立在結(jié)合的基礎(chǔ)之上的，功能學(xué)實(shí)驗(yàn)主要集中在細(xì)胞水平，蛋白和目的靶點(diǎn)結(jié)合后，引起了細(xì)胞體內(nèi)的信號(hào)應(yīng)答，使細(xì)胞的某些功能得到增強(qiáng)或者抑制等.比如ADCC,抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity ）是指表達(dá)IgGFc受體的NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞等，通過(guò)與已結(jié)合在病毒感染細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞等靶細(xì)胞表面的IgG抗體的Fc段結(jié)合，而殺傷這些靶細(xì)胞的作用。IgG抗體可介導(dǎo)這些細(xì)胞發(fā)揮ADCC作用，其中NK細(xì)胞是能發(fā)揮ADCC作用的主要細(xì)胞。在抗體介導(dǎo)的ADCC作用的發(fā)生過(guò)程中，抗體只能與靶細(xì)胞上的相應(yīng)抗原表位特異性結(jié)合，而NK細(xì)胞等效應(yīng)細(xì)胞可殺傷任何已與抗體結(jié)合的靶細(xì)胞，故抗體與靶細(xì)胞上的抗原結(jié)合是特異性的，NK細(xì)胞等對(duì)靶細(xì)胞的殺傷作用是非特異性的。 |
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187616157932樓2015-12-07 19:09:39
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3樓2015-12-08 10:08:38
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蛋白和目的靶點(diǎn)結(jié)合活性的強(qiáng)弱，通過(guò)同位素標(biāo)記可以得到蛋白活性強(qiáng)弱，我想知道是什么原理��？或者怎么做? 然后關(guān)于蛋白功能活性的強(qiáng)弱，是蛋白和靶點(diǎn)結(jié)合后，引起了細(xì)胞體內(nèi)的信號(hào)應(yīng)答，這樣的一個(gè)過(guò)程，可以通過(guò)什么實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證呢，網(wǎng)上關(guān)于蛋白活性的檢測(cè)，有MTT和結(jié)晶紫染色法，這兩種方法是檢測(cè)活細(xì)胞的數(shù)量的吧？對(duì)蛋白的活性又怎么能檢測(cè)出來(lái)呢？期待您的回答~ |
4樓2015-12-09 14:17:46
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5樓2015-12-09 14:19:29
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6樓2015-12-09 20:23:30
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【答案】應(yīng)助回帖
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18761615793: 金幣+20, ★★★★★最佳答案, 非常感謝 2015-12-09 22:03:14
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結(jié)合你得明白KD的概念，可以搜索一下ligand-binding assay，，能夠得到不少資料，先看些基礎(chǔ)的資料。蛋白引起的功能可能有多種，最簡(jiǎn)單的是蛋白和細(xì)胞作用后，把細(xì)胞殺死了，根據(jù)加入蛋白的越多細(xì)胞死亡的越多，通過(guò)檢測(cè)活細(xì)胞的數(shù)目來(lái)檢測(cè)蛋白的效果。MTT或者結(jié)晶紫都是測(cè)量活細(xì)胞多少的手段。 |
7樓2015-12-09 20:29:12
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8樓2015-12-09 22:08:57
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這看什么細(xì)胞了，腫瘤細(xì)胞掛了那就是蛋白活性好，正常細(xì)胞掛了那就是蛋白有毒性。MTT測(cè)的是細(xì)胞活力，你搜索一下MTT的作用原理就明白了 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
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9樓2015-12-09 22:16:52
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