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srr1990新蟲 (初入文壇)
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[求助]
釀酒酵母破壁 已有4人參與
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請問各位，有沒有用釀酒酵母系統(tǒng)做蛋白表達(dá)的？我的是胞內(nèi)表達(dá)，需要破壁，之前查過很多資料，用超聲波也試過，破不開。之后用的是酸洗玻璃珠，感覺效果還不錯(cuò)。我不知道小蟲子們都是怎么破壁的，因?yàn)橐獪y酶活，所以還要保持蛋白的酶活性。我想知道你們都是怎么知道破壁完全的？難道都是破完后用SDS-PAGE檢測看是否有條帶？ 還有，我破壁都是用實(shí)驗(yàn)室一般的渦旋振蕩器，也就震蕩10min左右，都是手動的，而且量也很少，每次破完上清也就200-300ul左右，怕再多破碎效果不好。請教各位，你們有沒有比較好的方法？ |
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8樓2015-12-08 08:20:01
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3樓2015-12-08 07:31:35
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【答案】應(yīng)助回帖
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srr1990: 金幣+1 2015-12-09 23:12:28
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srr1990: 金幣+1 2015-12-09 23:12:28
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我說一個(gè)不一樣的，冷凍干燥，保留細(xì)胞活性，還可以接著養(yǎng)，但細(xì)胞通透性增加，里面的酶可以釋放出來 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
7樓2015-12-08 08:06:48
惡魔的左眼
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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我們實(shí)驗(yàn)室做畢赤酵母蛋白表達(dá)，一般就是用超聲破碎的 你的蛋白表達(dá)量是不是很大啊，導(dǎo)致的很難破碎？ |
9樓2015-12-08 09:53:34
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