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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 新藥研發(fā) » 質量控制 » 液相色譜柱
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tang318lin金蟲 (小有名氣)
alina
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[求助]
液相色譜柱 已有5人參與
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2-氟-5-硝基苯甲醚 的HPLC檢測 分析儀器：Water2695/2996 色譜柱：capcell core c18 4.6*100mm 2.7um 預柱：XDB c18 4.6*12.5mm 5um 柱溫：40度， 流速：1.2ml/min A: 10m M KH2PO4 buffer（PH2.5） B; MeCN A B 0 75 25 10.8 52 48 19.2 20 80 25 20 80 25.1 75 25 30 75 25 20151117前的空白 現(xiàn)做的空白 試劑用的就是上次用過的，流動相新配的， 換到agilent1200上用，或是去保護柱，或是純水和乙腈走梯度 都是這樣,14-25min的峰放大了 但是用等度走乙腈水洗柱子是干凈的（一條直線），用乙腈洗也是干凈的，已經(jīng)排除儀器問題。 1.png 2.png 3.png |
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2015-12-13 16:28:10, 207 K
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【答案】應助回帖
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tang318lin(星�；蹆捍l(fā)): 金幣+2, 多謝回帖交流 2015-12-16 17:00:22
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tang318lin(星�；蹆捍l(fā)): 金幣+2, 多謝回帖交流 2015-12-16 17:00:22
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很大的可能是污染物富集在色譜柱上，乙腈比例增加到一定程度了，污染物被洗脫下來了，就造成了后面的基線太高和鬼峰。 A相換為純水，走梯度還是這樣的話，看看水還是乙腈有問題了。有時候水可能會有問題，屈臣氏蒸餾水不錯的。乙腈換Merck等比較好的品牌新開一瓶看看。 你文件里說“但是用乙腈水洗柱子是干凈的（一條直線），用乙腈洗也是干凈的”，如果乙腈比例用的很高，而且事先空白一直跑不好，應該不會是色譜柱臟了。 如果要排除是否色譜柱有問題，換一根新的試試看。 樓上說的你這個色譜柱粒徑和預柱差這么多也很奇怪的。 |
3樓2015-12-13 23:31:04
2樓2015-12-13 20:28:18
容月~
金蟲 (著名寫手)
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【答案】應助回帖
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tang318lin(星�；蹆捍l(fā)): 金幣+2, 多謝回帖交流 2015-12-16 17:00:30
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tang318lin(星�；蹆捍l(fā)): 金幣+2, 多謝回帖交流 2015-12-16 17:00:30
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都是用的相同的流動相和水在兩個機子上出現(xiàn)的峰在安捷倫上就會基線被放大 1.這是因為安捷倫的儀器精度達不到沃特世的精度，改善方法就是采用更好的純水和更好的梯度乙腈，更好的鹽。 2.水、鹽、乙腈雜質在色譜柱上附集，改善方法就是用高有機相反復沖洗，梯度平衡多次。如果還是不行那就只有換回去沃特世的機子上了。 這就是為什么很多省所會有不同的儀器，而不是單一品牌 ，特別是沃特世的儀器賣那么貴還是有原因的。 |
4樓2015-12-14 08:41:33
fengsea0214
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5樓2015-12-14 13:11:35
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