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tang318lin金蟲(chóng) (小有名氣)
alina
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[求助]
液相色譜柱 已有5人參與
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2-氟-5-硝基苯甲醚 的HPLC檢測(cè) 分析儀器：Water2695/2996 色譜柱：capcell core c18 4.6*100mm 2.7um 預(yù)柱：XDB c18 4.6*12.5mm 5um 柱溫：40度， 流速：1.2ml/min A: 10m M KH2PO4 buffer（PH2.5） B; MeCN A B 0 75 25 10.8 52 48 19.2 20 80 25 20 80 25.1 75 25 30 75 25 20151117前的空白 現(xiàn)做的空白 試劑用的就是上次用過(guò)的，流動(dòng)相新配的， 換到agilent1200上用，或是去保護(hù)柱，或是純水和乙腈走梯度 都是這樣,14-25min的峰放大了 但是用等度走乙腈水洗柱子是干凈的（一條直線(xiàn)），用乙腈洗也是干凈的，已經(jīng)排除儀器問(wèn)題。 1.png 2.png 3.png |
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2015-12-13 16:28:10, 207 K
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fengsea0214
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tang318lin(星�；蹆捍l(fā)): 金幣+3, 多謝回帖交流 2015-12-16 17:00:42
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tang318lin(星�；蹆捍l(fā)): 金幣+3, 多謝回帖交流 2015-12-16 17:00:42
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這個(gè)也屬于鬼峰的問(wèn)題或者基線(xiàn)不平的問(wèn)題，挺復(fù)雜的，你沒(méi)有把檢測(cè)波長(zhǎng)放出來(lái)，這個(gè)也對(duì)問(wèn)題判斷很有用的。 建議你這樣入手： 1）先用純水把鹽過(guò)渡一下，然后整個(gè)水相用甲醇置換，沖洗系統(tǒng)半個(gè)小時(shí)，再用純水走梯度看問(wèn)題還存不存在。 多走幾次空白，看看基線(xiàn)穩(wěn)定不穩(wěn)定。 2）如果好了，就再配鹽試試，如果鹽有問(wèn)題，就是鹽的問(wèn)題。如果沒(méi)好，就是別的問(wèn)題。那就更復(fù)雜了。 |
5樓2015-12-14 13:11:35
2樓2015-12-13 20:28:18
shihuman
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tang318lin(星�；蹆捍l(fā)): 金幣+2, 多謝回帖交流 2015-12-16 17:00:22
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tang318lin(星�；蹆捍l(fā)): 金幣+2, 多謝回帖交流 2015-12-16 17:00:22
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很大的可能是污染物富集在色譜柱上，乙腈比例增加到一定程度了，污染物被洗脫下來(lái)了，就造成了后面的基線(xiàn)太高和鬼峰。 A相換為純水，走梯度還是這樣的話(huà)，看看水還是乙腈有問(wèn)題了。有時(shí)候水可能會(huì)有問(wèn)題，屈臣氏蒸餾水不錯(cuò)的。乙腈換Merck等比較好的品牌新開(kāi)一瓶看看。 你文件里說(shuō)“但是用乙腈水洗柱子是干凈的（一條直線(xiàn)），用乙腈洗也是干凈的”，如果乙腈比例用的很高，而且事先空白一直跑不好，應(yīng)該不會(huì)是色譜柱臟了。 如果要排除是否色譜柱有問(wèn)題，換一根新的試試看。 樓上說(shuō)的你這個(gè)色譜柱粒徑和預(yù)柱差這么多也很奇怪的。 |
3樓2015-12-13 23:31:04
容月~
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tang318lin(星�；蹆捍l(fā)): 金幣+2, 多謝回帖交流 2015-12-16 17:00:30
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都是用的相同的流動(dòng)相和水在兩個(gè)機(jī)子上出現(xiàn)的峰在安捷倫上就會(huì)基線(xiàn)被放大 1.這是因?yàn)榘步輦惖膬x器精度達(dá)不到沃特世的精度，改善方法就是采用更好的純水和更好的梯度乙腈，更好的鹽。 2.水、鹽、乙腈雜質(zhì)在色譜柱上附集，改善方法就是用高有機(jī)相反復(fù)沖洗，梯度平衡多次。如果還是不行那就只有換回去沃特世的機(jī)子上了。 這就是為什么很多省所會(huì)有不同的儀器，而不是單一品牌 ，特別是沃特世的儀器賣(mài)那么貴還是有原因的。 |
4樓2015-12-14 08:41:33
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