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tylll銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
western 檢測(cè)tubulin，imageJ無法識(shí)別后面5個(gè)條帶。
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大家好，我剛做western blot ，用ECL曝tubulin（42kD），曝光10s，條帶有亮有淺。用imageJ檢測(cè)灰度， 問題來了：淺色條帶可以用魔棒（wand）檢測(cè)出來，而后面亮的條帶無法用wand檢測(cè)，圈框大小一致，請(qǐng)問是什么原因呢？ 我同時(shí)用imageJ檢測(cè)了同一張膜上的pMLC（18kD），也是后面的5個(gè)條帶無法檢測(cè)，請(qǐng)大家指點(diǎn)。 western條件：20ug上樣量，垂直電泳（90V，20min；125V 至膠底），半干轉(zhuǎn)40mA 、30min，5%Blocker 的TBST 室溫封閉1-1.5h，一抗過夜，TBST 5min洗3次，二抗室溫封閉1h，TBST 5min洗3次，ECL處理5min，曝光時(shí)間為5s、10s、自動(dòng)，做過幾次，結(jié)果條帶都不好，請(qǐng)大家指點(diǎn)。 tubulin 自動(dòng)曝光（1.5min） 20151212_122522_Ch+Marker.jpg pMLC 自動(dòng)曝光（1.5min） 20151212_121417_Ch+Marker.jpg |
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2樓2015-12-14 15:51:18
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3樓2015-12-14 15:59:30
tylll
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4樓2015-12-14 18:21:42
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