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tylll銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
western 檢測tubulin，imageJ無法識別后面5個條帶。
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大家好，我剛做western blot ，用ECL曝tubulin（42kD），曝光10s，條帶有亮有淺。用imageJ檢測灰度， 問題來了：淺色條帶可以用魔棒（wand）檢測出來，而后面亮的條帶無法用wand檢測，圈框大小一致，請問是什么原因呢？ 我同時用imageJ檢測了同一張膜上的pMLC（18kD），也是后面的5個條帶無法檢測，請大家指點。 western條件：20ug上樣量，垂直電泳（90V，20min；125V 至膠底），半干轉(zhuǎn)40mA 、30min，5%Blocker 的TBST 室溫封閉1-1.5h，一抗過夜，TBST 5min洗3次，二抗室溫封閉1h，TBST 5min洗3次，ECL處理5min，曝光時間為5s、10s、自動，做過幾次，結(jié)果條帶都不好，請大家指點。 tubulin 自動曝光（1.5min） 20151212_122522_Ch+Marker.jpg pMLC 自動曝光（1.5min） 20151212_121417_Ch+Marker.jpg |
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3樓2015-12-14 15:59:30
晴天1882
木蟲 (正式寫手)
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tylll
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4樓2015-12-14 18:21:42
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5樓2015-12-14 18:22:24
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