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alice keer新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
真菌菌絲提取及電泳圖求解釋?zhuān)? 已有1人參與
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用CTAB提取法提取真菌DNA,但是抽提DNA過(guò)程中只用了氯仿/異戊醇（24:1），沒(méi)有使用Tris飽和酚抽提。在1%瓊脂糖凝膠電泳中檢測(cè)有無(wú)條帶，如下圖所示，請(qǐng)教各位大神：這是什么原因？ 急需，感激不盡。。。。。。 20151216DNA(SHEN).jpg |
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angelyou
鐵蟲(chóng) (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
alice keer: 金幣+10, ★★★很有幫助, 謝謝你啦，marker我用的是5000的，太小了 2015-12-19 10:31:05
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
alice keer: 金幣+10, ★★★很有幫助, 謝謝你啦，marker我用的是5000的，太小了 2015-12-19 10:31:05
| 建議你把你做的全部步驟寫(xiě)上來(lái)，理論上我們CTAB提都是百發(fā)百中，沒(méi)有提不出來(lái)的~~~而且沒(méi)有酚應(yīng)該也不至于啥都沒(méi)有，另外跑基因組DNA你要用HINDiii的maker或者其他大于10k的maker，我猜，你第二泳道上面那個(gè)弱弱的有可能是，但是5000的maker看不出來(lái)那個(gè)帶多大 |
3樓2015-12-17 21:24:18
zyk1369
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2樓2015-12-17 15:51:36
alice keer
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4樓2015-12-19 10:31:19
alice keer
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1、用滅菌刀片（一般用酒精蘸取后在酒精燈上灼燒），刮取菌絲置于研缽中，加入適量石英砂和液氮迅速研磨2-3次確保磨成細(xì)粉（注意帶厚手套防凍及確保研磨過(guò)程中一直有液氮保護(hù)，最后一次研磨完倒入液氮保護(hù)，等待轉(zhuǎn)移到離心管中） 2、將研缽中的細(xì)粉迅速轉(zhuǎn)移到1.5ML的離心管中，加入65℃預(yù)熱的800ul 2%CTAB提取緩沖液和80ul10%SDS（也可以不用SDS），快速混勻，65℃水浴30-60Min，5-10min輕柔振蕩一次。 3、12000rpm常溫離心5min（一般也用10min），緩慢吸取上清液于一個(gè)新的離心管中（注意：有些離心完上層有Pr固體，吸取時(shí)注意不要吸到Pr等固體層），加入等體積的苯酚：氯仿：異戊醇（25:24:1）混合液抽提2次（有些也用氯仿和異戊醇或只用氯仿），10000-12000rpm離心10min 4、緩慢吸取上清液于一個(gè)新的離心管中，緩慢加入2.5體積的異丙醇（去除多糖）無(wú)水乙醇，再加入0.1體積的3mol/L的NaAC（注意順序）-20℃沉淀過(guò)夜 5、10000-12000rpm離心10min，丟棄上清液（倒置使管壁液體流干凈） 6、加入70%乙醇漂洗2次 7、斜拿離心管，用移液槍從沉淀的對(duì)面緊貼管壁處輕輕吸出乙醇，在室溫中敞蓋干燥 8、所得沉淀溶于50ulTE緩沖液（或者ddH2O，雙蒸水是其中的一種）中，最后置于-20℃保存 |
5樓2015-12-19 10:33:01
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