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[交流]
椪柑某基因全長擴增遇到困難，請大家指點指點，謝謝！
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現(xiàn)在在做椪柑HSF基因的克隆實驗，已有柑橘（椪柑屬于柑橘屬）全基因組序列，需要擴增的基因序列是在甜橙基因庫里搜索得到的（http://citrus.hzau.edu.cn/orange/index.php）。甜橙基因庫中找到目標基因CDS區(qū)域，用primerp5頭尾數(shù)出長度為17-24bp的堿基作為引物（下游為互補），但都無法擴增出條帶（17-27bp的都試過了），已經(jīng)做將近一個月了，很想在過年前做完，很是苦惱。 酶用的是TAKARA的LA-taq酶； cDNA使用前用actenin檢測，感覺也沒啥大問題； 同屬不同品種的植物基因序列會不會出現(xiàn)差異導致無法擴增？； 引物設計基本原則也知道，但是需要克隆CDS區(qū)域全序列，只能在頭尾設計的引物，所以在primer5上的評分并不高，但若椪柑中存在該基因PCR擴增引物應該也不會有多大問題呀！？； 大家以前有做過類似實驗嗎，請說出你們的想法和建議，謝謝��！ |
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4樓2015-12-25 20:54:38
2樓2015-12-25 18:00:37
3樓2015-12-25 20:47:51
yilberg
新蟲 (小有名氣)
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5樓2015-12-27 10:02:54
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