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尋一束光

鐵蟲 (小有名氣)

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蟲號(hào): 3738011
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性別: MM
專業(yè): 生物技術(shù)藥物

[求助] α-葡萄糖苷酶活力的測(cè)定，哪位大神做過啊？？跪求指導(dǎo) 已有1人參與

α-葡萄糖苷酶活力的測(cè)定
酶活力單位定義: 37 ℃ ， pH 6. 8 條件下，每 1 min 水解底物產(chǎn)生       1μmol/L 對(duì)硝基苯酚的酶量，定義為 1 個(gè)酶活力單位 ( U)。
酶活力測(cè)定:
   40μL 磷酸鉀緩沖液 ( pH 6. 8) ，加入 0.2 U/mLα-葡萄糖苷酶 20μL， DMSO 40μL，37 ℃ 恒溫 15 min 后加入 2mmol/LPNPG 20μL， 37 ℃ 恒溫反應(yīng) 20 min。再加入 0. 2 mol/L 的Na2 CO3 水溶液 80 μL，于 405 nm 波長下測(cè) A 值。

標(biāo)準(zhǔn)曲線制作根據(jù)采用的反應(yīng)體系，用磷酸緩沖液 ( pH 6. 8) 配制1000
umol/L PNP，稀釋成 400，300， 200， 150， 100， 50， 0umol/L。分別取7 種不同濃度的 PNP 溶液各 20μL，加入40μL 磷酸鉀緩沖液 ( pH 6. 8)  ，蒸餾水20ul,DMSO 40ul,0.2 mol/L  Na2CO3 的水溶液 80 μL，混勻，在 405 nm 下測(cè)定A，測(cè) 6 組取平均值。以 A 為縱坐標(biāo)Y，對(duì)硝基苯酚濃度為橫坐標(biāo)X，做出標(biāo)準(zhǔn)曲線,Y=aX+b。
      根據(jù)酶活力定義得酶活力=200X/40
但是我?guī)氲姆磻?yīng)時(shí)間是20分鐘�？墒俏以趺创_定20分鐘酶剛好反應(yīng)完全，如果反應(yīng)時(shí)間多余或少于20分鐘，那么測(cè)得的酶活力不就不準(zhǔn)了么？
新蟲入行，金幣不多，大家?guī)蛶兔~~

回復(fù)此樓

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靜心盡力

1樓 2015-12-27 09:58:13

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

乘風(fēng)浮云

新蟲 (正式寫手)

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專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)

【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

首先你的酶活定義有問題，每 min 水解底物產(chǎn)生1μmol/L 對(duì)硝基苯酚的酶量，其中對(duì)硝基苯酚應(yīng)該是umol單位。酶活體系中酶量為0.004U，底物量是0.04umol，按照這計(jì)算，10min就可以反應(yīng)完，酶活測(cè)的是初速度，所以你的反應(yīng)體系中的量肯定是有問題的。測(cè)活值也是不準(zhǔn)的

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回復(fù)此樓

2樓2015-12-28 14:17:50

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