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體外酶活檢測(cè) 已有2人參與
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求體外酶活檢測(cè)的方法，如果可以能寫出流程不 |
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2樓2015-12-28 16:47:47
yyy0305
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3樓2015-12-28 21:57:31
肖大爺1314
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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還原法 酶與底物在特定的條件下反應(yīng),酶可以促使底物釋放出還原性的基團(tuán).在此反應(yīng)體系中添加化學(xué)試劑 ,酶促反應(yīng)的產(chǎn)物可與該化學(xué)試劑發(fā)生反應(yīng),生成有色物質(zhì).通過(guò)在特定的波長(zhǎng)下 比色 ,即可求 出還原產(chǎn)物的含量 ,從而計(jì)算出酶活力的大小 . 色原底物法 通過(guò)底物與特定的可溶性生色基團(tuán)物質(zhì)結(jié)合,合成人工底物.該底物與酶發(fā)生反應(yīng)后 ,生色基團(tuán)可被釋放出來(lái) ,用分光光度法即可測(cè)定顏色的深淺,在與已知標(biāo)準(zhǔn)酶所做的曲線比較后 ,即可求出待測(cè)酶的活力. 粘度法 該法常用于測(cè)定纖維素酶、木聚糖酶和β-葡聚糖酶 的活力.木聚糖和β-葡聚糖溶液通常情況下可形成極高的粘度,當(dāng)酶作用于粘性底物時(shí)木聚糖和β-葡聚糖會(huì)被切割成較小的分子使其粘度大 為降低.基 于Poiseuille定律我們知道 ,只要測(cè)定一定條件下溶劑和樣品溶液的運(yùn)動(dòng)粘度,便可計(jì)算特性粘數(shù),并以此來(lái)判斷酶的活力. 高壓液相色譜法 酶與其底物在特定的條件下充分反應(yīng)后 ,在一定的色譜條件下從反應(yīng)體系中提取溶液進(jìn)行色譜分析,認(rèn)真記錄保留時(shí)間和色譜圖,測(cè)量各個(gè)樣的峰高和半峰高,計(jì)算出酶促反應(yīng)生成物的含量 ,從而換算出酶活力的數(shù)值. 免疫學(xué)方法 常用 于酶活性分析的免疫學(xué)方法包括:免疫電泳法 、免疫凝膠擴(kuò)散法.這兩種方法都是根據(jù)酶與其抗體之間可發(fā)生特定的沉淀反應(yīng) ,通過(guò)待測(cè)酶和標(biāo)準(zhǔn)酶的比較,最終確定酶活力.免疫學(xué)方法檢側(cè)度非常靈敏,可檢側(cè)出經(jīng)過(guò)極度稀釋后樣品中的酶蛋白,但其缺點(diǎn)是不同廠家生產(chǎn)的酶產(chǎn)品需要有不同特定的抗體發(fā)生反應(yīng). 瓊脂凝膠擴(kuò)散法 將酶作用的底物與瓊脂混合熔融后 ,倒入培養(yǎng)皿中或載波片上制成瓊脂平板.用打孔器在瓊脂平面上打出一個(gè)約4-5mm半徑 的小孔.在點(diǎn)加酶樣并培養(yǎng)24h以后 ,用染色劑顯色或用展開(kāi)劑展開(kāi)顯出水解區(qū),利用水解直徑和酶活力關(guān)系測(cè)定酶活力. 這個(gè)是類似問(wèn)題，LZ可以參考一下http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=9719558 http://www.biomart.cn/experiment/430/478/485/56895.htm |
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總有二狗咬朕4樓2015-12-29 13:16:35
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