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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 蛋白/酶 » 體外酶活檢測
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[求助]
體外酶活檢測 已有2人參與
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求體外酶活檢測的方法，如果可以能寫出流程不 |
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【答案】應助回帖
感謝參與，應助指數(shù) +1
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還原法 酶與底物在特定的條件下反應,酶可以促使底物釋放出還原性的基團.在此反應體系中添加化學試劑 ,酶促反應的產(chǎn)物可與該化學試劑發(fā)生反應,生成有色物質(zhì).通過在特定的波長下 比色 ,即可求 出還原產(chǎn)物的含量 ,從而計算出酶活力的大小 . 色原底物法 通過底物與特定的可溶性生色基團物質(zhì)結(jié)合,合成人工底物.該底物與酶發(fā)生反應后 ,生色基團可被釋放出來 ,用分光光度法即可測定顏色的深淺,在與已知標準酶所做的曲線比較后 ,即可求出待測酶的活力. 粘度法 該法常用于測定纖維素酶、木聚糖酶和β-葡聚糖酶 的活力.木聚糖和β-葡聚糖溶液通常情況下可形成極高的粘度,當酶作用于粘性底物時木聚糖和β-葡聚糖會被切割成較小的分子使其粘度大 為降低.基 于Poiseuille定律我們知道 ,只要測定一定條件下溶劑和樣品溶液的運動粘度,便可計算特性粘數(shù),并以此來判斷酶的活力. 高壓液相色譜法 酶與其底物在特定的條件下充分反應后 ,在一定的色譜條件下從反應體系中提取溶液進行色譜分析,認真記錄保留時間和色譜圖,測量各個樣的峰高和半峰高,計算出酶促反應生成物的含量 ,從而換算出酶活力的數(shù)值. 免疫學方法 常用 于酶活性分析的免疫學方法包括:免疫電泳法 、免疫凝膠擴散法.這兩種方法都是根據(jù)酶與其抗體之間可發(fā)生特定的沉淀反應 ,通過待測酶和標準酶的比較,最終確定酶活力.免疫學方法檢側(cè)度非常靈敏,可檢側(cè)出經(jīng)過極度稀釋后樣品中的酶蛋白,但其缺點是不同廠家生產(chǎn)的酶產(chǎn)品需要有不同特定的抗體發(fā)生反應. 瓊脂凝膠擴散法 將酶作用的底物與瓊脂混合熔融后 ,倒入培養(yǎng)皿中或載波片上制成瓊脂平板.用打孔器在瓊脂平面上打出一個約4-5mm半徑 的小孔.在點加酶樣并培養(yǎng)24h以后 ,用染色劑顯色或用展開劑展開顯出水解區(qū),利用水解直徑和酶活力關系測定酶活力. 這個是類似問題，LZ可以參考一下http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=9719558 http://www.biomart.cn/experiment/430/478/485/56895.htm |
總有二狗咬朕4樓2015-12-29 13:16:35
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yyy0305
至尊木蟲 (著名寫手)
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3樓2015-12-28 21:57:31
5樓2015-12-30 13:14:20
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