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[求助]
病毒plaque assay 不出現(xiàn)空斑！求助！ 已有2人參與
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我用的病毒是AcNPV，具體實(shí)驗(yàn)步驟如下： 1. 把sf9細(xì)胞鋪滿整個(gè)六孔盤底部，吸走培養(yǎng)基，加入1ml病毒，濃度分別是10-3、10-4、10-5、10-6、10-7，另外一個(gè)孔不加病毒作為對(duì)照，放入27度培養(yǎng)箱接種1h. 2.吸走病毒懸液后，蓋上一層終濃度為1%的agar膠2ml (2X media+低熔點(diǎn)瓊脂糖+10%FBS，低熔點(diǎn)瓊脂糖和2X medium各一半)，溫度保持在45度左右，保證細(xì)胞不被燙死。 3.待agar凝固后，在加入1ml新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基（無FBS），保證細(xì)胞的存活 4.28度細(xì)胞培養(yǎng)箱5天之后觀察 可以在接種高濃度病毒懸液中看到多角體，但是沒有形成空斑，到底是哪個(gè)步驟出錯(cuò)了，請(qǐng)大神指教！~~~謝謝！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
zzzzs: 金幣+5, ★★★很有幫助 2016-01-04 16:41:25
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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你有用細(xì)胞染色液入染色看空斑的形成嗎？比如用中性紅染色液？你的實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖鞘裁�？是檢測(cè)病毒滴度嗎？還是為了做空斑純化？ 如果是根據(jù)多角體的形成判斷空斑的話，5天估計(jì)還不足以形成足夠大的空斑。如果你的接種濃度太高的話，也不會(huì)形成空斑，而形成一片一片的感染細(xì)胞。要形成空斑的話，病毒接種量要小到MOI=0.01--0.001之間。 |
2樓2015-12-29 20:22:57
3樓2016-01-04 16:40:27
bibiwenbi
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4樓2016-01-12 11:05:01
5樓2016-01-23 13:50:30
燕子1314
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6樓2016-05-23 17:17:46
zoebio
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7樓2016-11-22 11:14:27
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