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[求助]
病毒plaque assay 不出現(xiàn)空斑！求助！ 已有2人參與
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我用的病毒是AcNPV，具體實驗步驟如下： 1. 把sf9細胞鋪滿整個六孔盤底部，吸走培養(yǎng)基，加入1ml病毒，濃度分別是10-3、10-4、10-5、10-6、10-7，另外一個孔不加病毒作為對照，放入27度培養(yǎng)箱接種1h. 2.吸走病毒懸液后，蓋上一層終濃度為1%的agar膠2ml (2X media+低熔點瓊脂糖+10%FBS，低熔點瓊脂糖和2X medium各一半)，溫度保持在45度左右，保證細胞不被燙死。 3.待agar凝固后，在加入1ml新鮮細胞培養(yǎng)基（無FBS），保證細胞的存活 4.28度細胞培養(yǎng)箱5天之后觀察 可以在接種高濃度病毒懸液中看到多角體，但是沒有形成空斑，到底是哪個步驟出錯了，請大神指教！~~~謝謝！ |
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