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rogersgene木蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助各位前輩分析一下這張大腸桿菌質(zhì)粒提取電泳圖 已有1人參與
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這是我們大三的分子生物學(xué)實驗。 材料:大腸桿菌，提前震蕩12h。 方法:堿裂解法 Marker: 2k，在最右邊。 瓊脂糖凝膠電泳，電泳電壓165v。 備注: 在加入溶液I II III后，略去了加氯仿異戊醇這一步，而是直接離心，轉(zhuǎn)移上清進(jìn)行后續(xù)步驟。 我的問題是，1.上方的紅框內(nèi)是其他同學(xué)做的，泳道下部有非常明顯的涂抹狀的帶，是rna嗎，如果是，是不是因為沒加rna酶所致？2.下方紅框的6個泳道是我們做的，請問自上而下，箭頭所指的三條帶各是什么？我的理解是:自上而下:開環(huán)質(zhì)粒，超螺旋質(zhì)粒，rna。(網(wǎng)上說堿裂解法線性質(zhì)粒少)3.我懷疑最上面的箭頭所指的帶含有基因組dna。4.右上角右一泳道的兩條恰好分開的帶合是什么？ 這是第一次發(fā)帖，本科生剛剛接觸分子，經(jīng)驗匱乏， 還請多多指教！ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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1. The smear bands with hypersensitivity as your mentioned have the greater molecular weight than RNA contamination which is less than 100bp in size. I believe that these are impurities, such as proteins and polysaccharides, migrating from the lower wells. 2. The relaxed circular molecular form, and the full-length linear molecular form of the uncut plasmid usually run very close together and are not always resolved from one another. The upper band is the combination of relaxed circular molecules and full-length linear molecules. You are right on the other bands. 3. The genomic DNA is 23kb or greater in size. In general, it is easy to separate the gDNA molecules and plasmid molecules on an agarose gel. 4. They are the relaxed circular molecules and the full-length linear molecules running as separate bands. |
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2015-12-30 16:58:41, 75.92 K
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
2樓2015-12-30 16:58:43
rogersgene
木蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 4258.4
- 帖子: 167
- 在線: 20.5小時
- 蟲號: 4172400
- 注冊: 2015-10-25
- 專業(yè): 植物保護(hù)生物技術(shù)
送紅花一朵 |
英文的回復(fù)，好厲害！我讀懂您的意思了，非常感謝！送上紅花一朵！但我想請問，為什么超螺旋質(zhì)粒的量那么少呢？超螺旋狀態(tài)不就是我們需要的嗎？是本來就這么少，還是我們提取水平的問題？ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
3樓2015-12-30 18:21:05
ayumi7667
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 17
- 帖子: 7
- 在線: 3.6小時
- 蟲號: 4096959
- 注冊: 2015-09-23
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
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????????С????????_plasmid??С ???D?????????l??????????|?w ????????B??o???A?y??С???????????????K????????????????????????z??С???_????l???????????? ?????摪??RNA ??????RNase ??? ????С???Android????? |
4樓2015-12-30 21:05:00
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