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[求助]
測序結果少了500bp可是PCR結果完全正確
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各位高手，我是新手，請大家不吝賜教。 我半年前克隆了一個大片段基因簇 （大概有80KB）到BAC里面，然后想做異源表達，可是發(fā)現(xiàn)不了目標產(chǎn)物，因此懷疑是基因簇在克隆時出現(xiàn)錯誤。所以我就把這個質粒提取出來交給商業(yè)機構測序，結果出來以后，我用NCBI去對比測序結果和真實的基因簇序列，結果顯示：除了基因簇中間的一個重要功能基因缺失了500 bp 以外，其余的結果都是100% 的 identity. 然后我深深地懷疑這個結果，總感覺不太可能，所以我就設計了一對PCR引物，用來擴增這些缺失的堿基，結果PCR是陽性的，為了進一步確認，我又把這個PCR的產(chǎn)物提純測序，結果正是缺失的那500 bp. 對了忘了說明，基因簇的測序結果就是從缺失部分地兩端開始讀取和結束的，會不會是這個原因呢？菜鳥一個，說的不明白請諒解，如果各位達人有什么疑問，我可以補充，快要被這個問題煩死了。下面畫了一個草圖，新手金幣不多，萬分感謝。 Picture1.jpg |
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9樓2016-01-04 10:58:58
2樓2016-01-04 07:14:08
3樓2016-01-04 07:18:13
4樓2016-01-04 07:21:27
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