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yang2325182金蟲 (正式寫手)
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[交流]
酶活定義
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大家好,我最近在做一個(gè)固定化酶相關(guān)的實(shí)驗(yàn),需要比較固定化酶(immobilized enzyme)與游離酶(free enzyme)之間一些性質(zhì)的差異。 我看文章上大家基本都是用relative activity來表示沒活性的差異,比如說把某個(gè)催化活性作為百分之百,其他的跟他比,而在實(shí)際實(shí)驗(yàn)測量 過程中,有些人是將反應(yīng)生成物啊,hplc峰面積啊等等作為酶活力的衡量指標(biāo)。 我想請(qǐng)問一下,這種相對(duì)的設(shè)定是有一定的規(guī)矩的嗎?還是說必須要測量米氏常數(shù)來衡量。因?yàn)閺拿资铣?shù)的定義來看的話,在反應(yīng)經(jīng)過較長 時(shí)間之后,確實(shí)是不能夠很好的反應(yīng)酶與底物的親和性,而作為初始反應(yīng)速率的米氏常數(shù)可能會(huì)更合適吧。 所以在此發(fā)帖,希望能夠得到蟲友的幫助,求指點(diǎn),我到底該用哪個(gè)來作為我的酶活呢? 另外,我想問一下,我是否可以選擇合適的底物濃度與酶濃度,確保我的底物水解量保持在短時(shí)間內(nèi)(5min內(nèi))處于一個(gè)較低的水解率(小于10%)這樣,保證底物還是處于一個(gè)較高的濃度,這樣的底物的水解量,是否可以代表初始反應(yīng)速率?而我不需要去計(jì)算米氏常數(shù)km kcat(由于反應(yīng)難于監(jiān)測,測量誤差經(jīng)過計(jì)算會(huì)很大)直接用這樣的底物水解值做一個(gè)relative activity? 求大神指點(diǎn)~~ |

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