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yang2325182金蟲 (正式寫手)
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[交流]
酶活定義
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大家好，我最近在做一個固定化酶相關(guān)的實驗，需要比較固定化酶(immobilized enzyme)與游離酶（free enzyme）之間一些性質(zhì)的差異。 我看文章上大家基本都是用relative activity來表示沒活性的差異，比如說把某個催化活性作為百分之百，其他的跟他比，而在實際實驗測量 過程中，有些人是將反應(yīng)生成物啊，hplc峰面積啊等等作為酶活力的衡量指標(biāo)。 我想請問一下，這種相對的設(shè)定是有一定的規(guī)矩的嗎？還是說必須要測量米氏常數(shù)來衡量。因為從米氏常數(shù)的定義來看的話，在反應(yīng)經(jīng)過較長 時間之后，確實是不能夠很好的反應(yīng)酶與底物的親和性，而作為初始反應(yīng)速率的米氏常數(shù)可能會更合適吧。 所以在此發(fā)帖，希望能夠得到蟲友的幫助，求指點(diǎn)，我到底該用哪個來作為我的酶活呢？ 另外，我想問一下，我是否可以選擇合適的底物濃度與酶濃度，確保我的底物水解量保持在短時間內(nèi)（5min內(nèi)）處于一個較低的水解率（小于10%）這樣，保證底物還是處于一個較高的濃度，這樣的底物的水解量，是否可以代表初始反應(yīng)速率？而我不需要去計算米氏常數(shù)km kcat（由于反應(yīng)難于監(jiān)測，測量誤差經(jīng)過計算會很大）直接用這樣的底物水解值做一個relative activity? 求大神指點(diǎn)~~ |
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