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sunny茉金蟲 (初入文壇)
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[求助]
熒光發(fā)射圖譜出現(xiàn)瑞利散射，瑞利散射對(duì)所測(cè)的熒光基團(tuán)強(qiáng)度有影響嗎 已有1人參與
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掃描FAM熒光探針的發(fā)射譜圖，設(shè)定激發(fā)波長(zhǎng)480nm，掃描范圍480—600nm。 結(jié)果： 在488nm處出現(xiàn)了1個(gè)極大峰強(qiáng)度600左右（傳說中的瑞利散射？），在519nm處出現(xiàn)目標(biāo)峰，強(qiáng)度只有20。 請(qǐng)問熒光強(qiáng)度除了與熒光探針濃度有關(guān)外（本次探針濃度50nM），瑞利散射會(huì)不會(huì)對(duì)熒光強(qiáng)度有削弱作用，削弱強(qiáng)度明顯嗎？怎么消除瑞利散射？ 還有個(gè)問題，發(fā)射譜圖與同步譜圖各自作用是什么？ 剛剛接觸，小白一枚，請(qǐng)各位大神多多指教�。� |
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Ars_zq
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瑞利散射光波長(zhǎng)與入射光波長(zhǎng)一致，488處是拉曼散射。要避免散射干擾，可以扣除背景或選擇其它波長(zhǎng)激發(fā)。 恒波長(zhǎng)同步熒光在平時(shí)用得較多，主要是針對(duì)被測(cè)物中有兩種或以上熒光物質(zhì)，但無法用同一激發(fā)波長(zhǎng)去檢測(cè)時(shí)使用。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
2樓2016-01-12 15:02:34
primayclee
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（1）你在測(cè)試熒光的過程中可能有拉曼散射的干擾 （2）光散射分為瑞利散射（波長(zhǎng)與激發(fā)波長(zhǎng)相同），和拉曼散射（與激發(fā)波長(zhǎng)不同）；拉曼散射又分為Stokes線（波長(zhǎng)比激發(fā)波長(zhǎng)大的部分，強(qiáng)度大，我們一般所說的拉曼光譜）和Anti-Stokes線（波長(zhǎng)比激發(fā)波長(zhǎng)小的部分，強(qiáng)度小，一般不關(guān)注）。 （3）所以488nm除肯定不是瑞利散射，可能是拉曼散射。 （4）瑞利線本身很強(qiáng)，會(huì)對(duì)熒光有明顯影響，消除瑞利散射只需要掃描范圍不包含原激發(fā)波長(zhǎng)就行。 （5）消除拉曼散射也可以如（4）不包含拉曼線就行，但也可以改變激發(fā)光波長(zhǎng)來消除。 （6）發(fā)射譜是在固定某一個(gè)激發(fā)波長(zhǎng)情況下，探究不同波長(zhǎng)處的熒光強(qiáng)度。 （7）同步譜：應(yīng)該是變化激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)，采集可得到一個(gè)3D熒光強(qiáng)度分布圖，即熒光強(qiáng)度----激發(fā)波長(zhǎng)----發(fā)射波長(zhǎng)的三維圖譜。 |
3樓2016-01-14 22:16:46
zheng1zhi1
新蟲 (初入文壇)
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【答案】應(yīng)助回帖
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此峰應(yīng)當(dāng)不是瑞利散射，瑞利散射通常與入射波長(zhǎng)相同，或者是整數(shù)倍頻(多級(jí)瑞利散射)。根據(jù)提供的資料，此峰可能是拉曼散射，拉曼散射的峰值一般比熒光值小很多，但在樣品濃度低，儀器靈敏度高時(shí)，可能會(huì)出現(xiàn)很強(qiáng)的拉曼峰，甚至高于熒光 以下是不同濃度硫酸奎寧的熒光譜圖 鏈接: https://pan.baidu.com/s/1xz-ihxMzZjeAK0ZC9d_PaQ 提取碼: suaa 同步譜的問題也放張圖吧，更好理解 鏈接: https://pan.baidu.com/s/1Od1sSnB_GMAHKOT3p_AY-A 提取碼: daya 更多可以參考 熒光分析法 許金鉤著 在下也是新人，有問題一起討論  [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
4樓2019-03-17 10:37:07
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