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sunny茉金蟲 (初入文壇)
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[求助]
熒光發(fā)射圖譜出現(xiàn)瑞利散射,瑞利散射對所測的熒光基團強度有影響嗎 已有1人參與
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掃描FAM熒光探針的發(fā)射譜圖,設(shè)定激發(fā)波長480nm,掃描范圍480—600nm。 結(jié)果: 在488nm處出現(xiàn)了1個極大峰強度600左右(傳說中的瑞利散射?),在519nm處出現(xiàn)目標(biāo)峰,強度只有20。 請問熒光強度除了與熒光探針濃度有關(guān)外(本次探針濃度50nM),瑞利散射會不會對熒光強度有削弱作用,削弱強度明顯嗎?怎么消除瑞利散射? 還有個問題,發(fā)射譜圖與同步譜圖各自作用是什么? 剛剛接觸,小白一枚,請各位大神多多指教! |
新蟲 (正式寫手)
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瑞利散射光波長與入射光波長一致,488處是拉曼散射。要避免散射干擾,可以扣除背景或選擇其它波長激發(fā)。 恒波長同步熒光在平時用得較多,主要是針對被測物中有兩種或以上熒光物質(zhì),但無法用同一激發(fā)波長去檢測時使用。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
鐵蟲 (初入文壇)
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(1)你在測試熒光的過程中可能有拉曼散射的干擾 (2)光散射分為瑞利散射(波長與激發(fā)波長相同),和拉曼散射(與激發(fā)波長不同);拉曼散射又分為Stokes線(波長比激發(fā)波長大的部分,強度大,我們一般所說的拉曼光譜)和Anti-Stokes線(波長比激發(fā)波長小的部分,強度小,一般不關(guān)注)。 (3)所以488nm除肯定不是瑞利散射,可能是拉曼散射。 (4)瑞利線本身很強,會對熒光有明顯影響,消除瑞利散射只需要掃描范圍不包含原激發(fā)波長就行。 (5)消除拉曼散射也可以如(4)不包含拉曼線就行,但也可以改變激發(fā)光波長來消除。 (6)發(fā)射譜是在固定某一個激發(fā)波長情況下,探究不同波長處的熒光強度。 (7)同步譜:應(yīng)該是變化激發(fā)波長和發(fā)射波長,采集可得到一個3D熒光強度分布圖,即熒光強度----激發(fā)波長----發(fā)射波長的三維圖譜。 |
新蟲 (初入文壇)
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此峰應(yīng)當(dāng)不是瑞利散射,瑞利散射通常與入射波長相同,或者是整數(shù)倍頻(多級瑞利散射)。根據(jù)提供的資料,此峰可能是拉曼散射,拉曼散射的峰值一般比熒光值小很多,但在樣品濃度低,儀器靈敏度高時,可能會出現(xiàn)很強的拉曼峰,甚至高于熒光 以下是不同濃度硫酸奎寧的熒光譜圖 鏈接: https://pan.baidu.com/s/1xz-ihxMzZjeAK0ZC9d_PaQ 提取碼: suaa 同步譜的問題也放張圖吧,更好理解 鏈接: https://pan.baidu.com/s/1Od1sSnB_GMAHKOT3p_AY-A 提取碼: daya 更多可以參考 熒光分析法 許金鉤著 在下也是新人,有問題一起討論 ![]() [ 發(fā)自手機版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
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